Нужна помощь в написании работы?

Секрет вымени коров, давших положительную реакцию с одним из быстрых маститных тестов, дополнительно исследуют бактериологически для выделения патогенной микрофлоры.

Для таких исследований отбирают пробы молока из четвертей вымени, реагирующих на быстрый маститный тест и дающих положительную пробу отстаивания. Исследуемое молоко отбирают в стерильные пробирки в количестве 10-15мл. Полученный материал в количестве 0,2 мл наносят на поверхность твердых питательных сред: Эндо, Левина, ЖСА (желточно-солевом агаре), Сабуро, 5 % -ый кровяной агар; а также в жидкие питательные среды накопления: селенитовый бульон и сахарный бульон. Посев на поверхность твердых питательных сред проводят шпателем. Посевы на средах Эндо, Левина, 5 % -го кровяного агара, а также жидкие питательные среды накопления инкубируют в термостате при температуре 370С в течении 24 часов; посевы на ЖСА инкубируют в термостате при температуре 370С в течении 48 часов; посевы на среде Сабуро инкубируют в термостате при температуре 220С в течении 5 суток. Ежедневно все среды просматривают. Через 24 часа со сред накопления проводят пересев исследуемого материала, с помощью петли, на плотные питательные среды: с селенитового бульона - на среду Плоскирева и Висмут-сульфит-агар; с сахарного бульона - на 5% -ый кровяной агар, ЖСА, среду Эндо. Подозрительные (лактозонегативные) колонии (КОЕ - колонии образующие единицы) со сред Эндо, Левина, Плоскирева отсевают на дифференциально-диагностический скошенный агар Клиглера. Подсчитывают число выросших колоний (КОЕ) на плотных питательных средах. На ЖСА через 48 часов учитывают рост белых, кремовых, палевых, золотистых колоний (КОЕ), обладающих лецитиназной активностью и без нее. Отсевают на скошенный МПА, ставят пробы на плазмокоагуляцию и ферментацию маннита и пробу на окисление глицерина. С косяков агара Клиглера и МПА делают мазки с окраской по Граму и наблюдают: в одних случаях - грамотрицательные палочки средних размеров с закругленными концами, распологающиеся беспорядочно; в других случаях - грамположительные кокки мелких и средних размеров, располагающиеся гроздьями, поодиночке, попарно. В итоге определяют вид стафилококков. На 5% -ом кровяном агаре учитывают рост мелких колоний (КОЕ): белесых, бесцветных, сероватых, дающих зону альфа и бетта гемолиза и без нее. Отсевают на сектора 5% -го кровяного агара и изучают морфологию с окраской по Граму. В случае обнаружения грамположительных кокков мелких и средних размеров, распологающихся поодиночке, попарно, цепочками, беспорядочно, отсевают на МПА, обезжиренное молоко с метиленовым синим, желчный бульон, ЭДДС-агар. По изменению или наличию роста на данных средах определяют род и вид некоторых стрептококков.

Со среды Клиглера ставят пестрый биохимический ряд Гисса, изменение сред которого позволяет определить вид энтеробактерий.

ВСА (висмут - сульфит - агар) инкубируют в термостате при температуре 370 С в течении 48 часов, затем просматривают с целью обнаружения черных, сероватых, блестящих, округлых, маслянистых колоний (КОЕ), дающих вокруг себя зону с металлическим (ртутным) блеском среды. Подозрительные колонии отсевают на среду Клиглера. Ставят пестрый биохимический ряд Гисса. На среде Сабуро отбирают белые, крупные, плотные, сметанообразные колонии, с характерным кисловато-дрожжевым запахом. Данные колонии отсевают на МПА, окрашивают мазки по Граму. В случае обнаружения грамположительных крупных овальных клеток, располагающихся беспорядочно, либо почкуясь в виде веток, ставят пестрый биохимический ряд Гисса и посев на картофельный агар для определения филоментации и выделения вида грибов рода Candida.

 

 

 

 

pic1_26092012101413.jpg

 

 

 

Пробы отправляют в ветеринарную лабораторию, где их исследуют:

1) на чувствительность микрофлоры молока (секрета) к антибиотикам;

2) на наличие основных возбудителей мастита (патогенных стафилококков и агалактийного стрептококка).

Внимание!
Если вам нужна помощь в написании работы, то рекомендуем обратиться к профессионалам. Более 70 000 авторов готовы помочь вам прямо сейчас. Бесплатные корректировки и доработки. Узнайте стоимость своей работы.

 

Определение чувствительности микрофлоры молока

к антибиотикам

Исследуемое молоко с соблюдением стерильных условий разливают по 2 мл в стерильные пробирки. Пробирок должно быть на две больше, чем дисков с антибиотиками.

В одной из пробирок определяют реакцию (pH) молока и добавляют в него 0,1 мл бромтимолблау (раствор бромтимолблау готовят так же, как и для диагностики маститов). В зависимости от pH молока смесь окрашивается от желтого (кислое молоко), салатного, зеленого до синего (щелочное молоко) цвета. Записав результат (цвет смеси), данную пробу исключают из опыта. В оставшиеся пробирки (кроме одной) добавляют по одному диску того или иного антибиотика.

Все пробирки с молоком выдерживают при 37 °С в течение 18 - 20 часов в термостате или автоматически регулируемой водяной бане, после чего во всех пробирках проверяют кислотность молока раствором бромтимолблау.

Если кислотность молока в пробирке без антибиотиков до опыта и после выдерживания в течение 18 - 20 часов в термостате одинакова, патогенных бактерий в молоке нет. При наличии микрофлоры кислотность молока в пробирке без антибиотиков после выдерживания в термостате увеличивается. В этом случае проверяется кислотность молока в пробирках с антибиотиками.

Если кислотность молока с тем или иным антибиотиком (после выдерживания в термостате) не выше первоначальной (до выдерживания в термостате), значит, бактерии, находящиеся в молоке, высокочувствительны к данному антибиотику. Наоборот, если кислотность молока в пробирках с антибиотиками после выдерживания в термостате увеличивается, из этого следует, что находящиеся в молоке бактерии устойчивы к данному антибиотику, причем, чем выше кислотность молока, тем устойчивее микроорганизмы.

 

 

Исследование молока на наличие кишечных палочек

Колонии грамотрицательных палочек с кровяного агара отсевают на элективную среду КОДА и инкубируют при 37 °С в течение 24 часов. Изменение сине-фиолетового цвета до желто-зеленого указывает на наличие бактерий группы кишечных палочек.

Для подтверждения диагноза следует отобрать пробы молока вторично и исследование повторить. Вторичное обнаружение кишечных палочек в молоке подтверждает их этиологическую роль в воспалительном процессе вымени.

Для идентификации микроорганизмов делают высевы с жидкой среды КОДА на МПА с целью получения отдельных колоний.

При необходимости установления рода бактерий выделенные микроорганизмы исследуют по тестам ТЛИМАЦ (температурный тест, сбраживание лактозы, индолообразование, реакции с метилрот и на ацетоин, способность утилизировать цитраты). С целью выделения энтеропатогенных штаммов кишечных палочек используют О-коли сыворотки.

 

 

zolotistiy-stafilikok-v-chashe-petri.jpg

 

134569491.jpg

Получить выполненную работу или консультацию специалиста по вашему учебному проекту
Узнать стоимость
Поделись с друзьями