Для целей генной инженерии наибольшее значение имело выделение рестриктаз, которые дают фрагменты с так называемыми «липкими» (комплементарными) концами. В случае их использования разрывы ДНК происходят в местах, расположенных наискось: на концах каждого из полученных фрагментов остаются короткие одноцепочечные «хвосты» из нескольких нуклеотидов (табл. 2.1). Если объединить в одной пробирке фрагменты ДНК любого происхождения, полученные с помощью одной и той же рестриктазы, дающей «липкие» концы, то эти фрагменты соединятся между собой. Однако водородные связи между комплементарными азотистыми основаниями недостаточно прочны, чтобы стабильно удерживать два объединенных фрагмента ДНК. Для воссоединения фосфодиэфирных связей между концами сшиваемых фрагментов ДНК необходим фермент ДНК-лигаза. Этот фермент впервые выделен в 1967 году из культуры E. coli, инфицированной бактериофагом Т4, при изучении энзимологии процесса репликации ДНК (то есть еще до того, как научились «разрезать» ДНК).
Таблица 2.1.
Нуклеотидные последовательности, распознаваемые некоторыми ферментами рестрикции, и характер получаемых концов ДНК (по Глик, Пастернак, 2002)
Поможем написать любую работу на аналогичную тему