Методы изучения растительных клеток. Метод микроскопирования. Строение светового микроскопа. Приготовление временных и постоянных препаратов.

1) Световая микроскопия

2) Электронная микроскопия

3) Метод замораживания-скалывания

4) Дифференциальное центрифугирование

5) Метод культуры клеток

Микроскопия – совокупность методов исследования объектов с помощью микроскопов. Самое главное в микроскопии это четко увидеть очертание объектов, что позволяет правильно их идентифицировать.  Различается несколько методов микрокопирования. 

• Оптическая микроскопия
• Рентгеновская микроскопия
• Электронная микроскопия
• Сканирующая зондовая микроскопия

1.1 Временные препараты. Подготовка материала для временных препаратов включает фиксацию и окраску.

Фиксация. Фиксация – это процесс быстрой консервации клеточных структур, при котором все физиолого-биохимические процессы останавливаются, а водорастворимые вещества переходят в нерастворимое состояние.

Окрашивание. Окрашивание позволяет выявлять внутриклеточные структуры, обладающие повышенным сродством к определенным красителям. Красители – это относительно низкомолекулярные органические вещества, обладающие повышенным сродством к определенным химическим компонентам клетки.

Существует множество красителей, которые используются для различных целей. Нужно иметь в виду, что выбор красителя связан с характером фиксации и различными методами предварительной обработки клеток.
1.2 Постоянные препараты. Постоянные препараты готовятся по специальным методикам, обеспечивающих их хранение в течение десятков лет. К постоянным препаратам относятся мазки, тотальные препараты и срезы.

1.Взятие материала (кусочка ткани или органа) для приготовления препарата.
2.Фиксация материала. Сразу после окончания фиксации производится промывка материала или водой (после водных фиксаторов), или 80%-ным спиртом (после спиртовых фиксаторов). Фиксация обеспечивает предотвращение процессов разложения, что способствует сохранению целостности структур.

3. Обезвоживание в спиртах возрастающей концентрации. Параллельно происходит уплотнение материала. Последовательное перемещение материала через ряд растворов называется проводка.

4. Просветление. Это пропитывание материала растворителем парафина – ксилолом (бензолом, хлороформом).

5. Заливка в парафин. Это замещение ксилола парафином. Образец помещают в смесь ксилола и парафина при температуре 55...57 градусов и оставляют в термостате при этой температуре до полного испарения ксилола (от нескольких часов до нескольких суток).

6. Приготовление срезов на специальных приборах (микротоме или ультрамикротоме) с помощью специальных ножей. Срезы для световой микроскопии приклеиваются на предметные стекла, а для электронной микроскопии – монтируется на специальные сеточки.

7. Окрашивание срезов.  Окрашивание срезов (в световой микроскопии) или напыление их солями металлов (в электронной микроскопии) применяют для увеличения контрастности изображения отдельных структур при рассматривании их в микроскопе.