Культивирование клеток и тканей растений производят на специальных пит.средах, которые содержат все необходимые для их роста макро- и микроэлементы, углеводы, витамины и фитогормоны. Среду надо стерилизовать (автоклавировать), чтобы на ней не развивались микроорганизмы. Культуру клеток получают из так называемого первичного эксплантата: изолированного зародыша семени, верхушки или средней части стебля, сегмента листа и т.д. Поверхность первичных эксплантатов стерилизуют в стерилизующих растворах(70% этиловый спирт),затем их промывают дистил.водой, после чего они готовы для введения в культуру. Манипуляции с изолированными тканями – введение эксплантатов в культуру, пересадку культур на свежую пит.среду – производят в условиях асептики(под ламинарным боксом),используя стерильные инструменты и приборы. Культивирование клеток осуществляют в пробирках или колбах, укупоренных ватными пробками или специальными крышками, обеспечивающими защиту внутреннего объема этих сосудов от проникновения посторенней микрофлоры.
В целом культура клеток растений аналогична культуре бактерий. Применяют 2 основных способа культивирования: на твердых (агаризированных) и жидких пит.средах. Обязательное условие – это присутствие в среде двух групп фитогормонов: ауксинов и цитокининов. Ауксины инициируют процесс дедифференцированных клеток, а цитокинины вызывают деление дедифференцированных клеток.
Дедифференцировка растительных клеток является важным элементом получения активно делящихся культур. Дело в том, что глубоко специализированные клетки растений утрачивают способность к делению. Для того, чтобы они вновь ее приобрели, необходимо как бы вновь вернуть их в меристематическое состояние, т.е. дедифференцировать.
Следует также упомянуть об культивировании на жидкой пит.среде культуру протопластов. Их получают из паренхимы листа, из каллюстных и суспензионных культур. С помощью спец.ферментов, выделенных из м.о.целюлозные оболочки можно растоврить. Чтобы не повредить содержимое клетки в ходе и после удаления оболочки в пит.среду добавляют осмотики(сахара в больших концертациях). Протопласт сужается и превращается в шар отделенный от оболочки.
Разработка методов получения клонов из единичных клеток при их культивировании in vitro имеет исключительно важное значение для генетической инженерии растений, поскольку делает возможным создание трансгенных растений из единичных трансформированных клеток.
Поможем написать любую работу на аналогичную тему