На практике при получении мутантов, генетическом анализе и т. п. часто приходится выделять чистые линии бактериофагов, представляющих собой потомство одной фаговой частицы. Существуют приемы, позволяющие произвести выделение чистых линий бактериофагов с минимальными затратами питательных сред и времени.
Техника получения чистых линий фагов. Смесь Т-четных и Т-нечетных бактериофагов, образующих крупные и мелкие негативные колонии, высевают на газон бактерий Е. coli В. Для этого в полужидкий 0,7%-й расплавленный агар вносят 0,2 мл культуры бактерий, перемешивают и наслаивают в чашки Петри на поверхность 1,5%-го питательного агара. Чашки подсушивают, затем полоски стерильной фильтровальной бумаги обмакивают в смесь бактериофагов и проводят ими параллельные линии по газону бактериальной культуры (сверху вниз, до 10 линий на чашку). Чашки помещают в термостат с температурой 37°С. В местах нанесения фага будут видны зоны лизиса бактериальной культуры, причем на первых полосах - более выраженный лизис, а на последних - отдельные негативные колонии фагов. Отмечают две изолированные колонии (крупную и мелкую) и с помощью бактериологической петли переносят каждую вместе с агаром в отдельную пробирку с 1 мл бульона. Из каждой пробирки стерильной бумажной полоской производят рассев фага на газон чувствительных бактерий. Чашки инкубируют при температуре 37 °С. Убеждаются, что после расчистки на каждой чашке формируются негативные колонии одного типа, в противном случае процедуру расчистки повторяют.
Линия фага считается чистой, когда однородные негативные колонии фага образуются на протяжении не менее 5 пассажей.
Поможем написать любую работу на аналогичную тему