Отбор случайных мутаций.

Отбор случайных мутаций применяют тогда, когда не известен путь

синтеза метаболита и его регуляция. Этот метод отбора всегда осущест

вляется в несколько последовательных этапов, поэтому его часто называ

ют ступенчатым отбором. Суть метода заключается в следующем:

•      Исходная культура обрабатывается мутагеном, взятым в нескольких

дозах.

•      Отбирают 100 клонов, выросших после воздействия каждой отдельной дозы мутагена и определяют уровень продукции метаболита.

Уровень продукции выражают в процентах по отношению к уровню продукции исходной культуры и распределяют в вариационном ряду.

•      Полученные вариационные ряды, число которых соответствует числу примененных доз, сравнивают с контрольным рядом.

•      Отбирают плюсварианты и оценивают их продукционную способность в нескольких повторах.

•      Выбирают варианты, дающие максимальную продукцию, и еще раз проверяют их уровень продукции после 2–3 пересевов на агаризованной

среде.

•      Все данные суммируются и обрабатываются статистически.

•      Выбирают вариант, уровень продукции которого достоверно превышает уровень продукции исходного штамма.

Последовательные этапы отбора, проводимого непосредственно по количественному признаку, позволяют «собрать» в геноме продуцента группу мутаций, сочетание которых и обеспечивает высокий уровень продукции. Такой подход широко применяется для получения сверхпродуцентов аминокислот и особенно антибиотиков. С большим эффектом он применялся в течение многих десятилетий. Классическим примером является создание Висконсинской серии продуцентов пенициллина, которая была осуществлена в США на штамме Penicillum chrysogenum с применением различных физических и химических мутагенов. Селекция штаммов этой серии, продолжавшаяся более 30 лет, позволила повы сить уровень продукции пенициллина в несколько тысяч раз по сравнению с уровнем исходного штамма.