Основным требованием, предъявляемым к составу питательной среды, является ее полноценность для роста продуцента и обеспечения синтеза целевого продукта. Микроорганизмам нужны соединения, содержащие углерод, азотистые вещества, водород, кислород. В состав среды должны входить такие минеральные вещества, как магний, кальций, фосфор, сера, железо, калий и некоторые другие. Состав среды для того или иного микроорганизма различен, однако все продуценты ферментов усваивают углерод преимущественно в виде органических соединений, водород – в виде воды и в составе органических соединений, кислород – из основного состава среды и в молекулярном виде. Питательные вещества среды расходуются микроорганизмами не только на построение растущей клетки, но и на обеспечение энергией основных жизненных процессов.
Микроорганизмы очень чувствительны к составу среды, на которой растут, причем одни соединения они потребляют интенсивно, а другие остаются почти неиспользованными. Следует помнить, что не всегда интенсивный рост микроорганизма способствует максимальному накоплению ферментов.
Так как подавляющее большинство продуцентов ферментов является аэробами, почти все углеводы потребляются ими путем окисления и основными продуктами метаболизма являются диоксид углерода и вода. Накапливающиеся в процессе роста культуры промежуточные продукты окисления, такие, как кетокислоты, ди- и трикарбоновые кислоты, альдегиды, служат по мере потребления углеводов основным источником углерода в среде. Если состав среды подобран верно и процесс ведется правильно, то избыточного накопления промежуточных продуктов не происходит. Хорошим источником углерода в среде могут быть жиры и масла. Это следует помнить при использовании жировых пеногасителей. В процессе культивирования, пока в среде есть жир, наблюдается образование жирных кислот, и среда заметно подкисляется. Микроорганизмы потребляют также органические кислоты и спирты.
Источником азота для микроорганизмов – продуцентов ферментов могут быть сложные органические вещества, их гидролизаты и минеральные соли. Богаты азотными веществами кукурузный экстракт, соевая и пшеничная мука, гидролизат казеина и т.д. Минеральный азот в среде обычно представлен аммонийными солями и нитратами. Органические соединения и аммонийные соли содержат азот в восстановленной форме, поэтому он легко и быстро потребляется. Азот же нитратов должен быть сначала восстановлен и потом уже усвоен микроорганизмами. Поэтому при их совместном присутствии в среде большая скорость потребления аммонийного азота, чем нитратного. Введение аммонийных солей приводит к подкислению среды (в растворе остается анион кислоты), при введении нитратов среда подщелачивается (в растворе остается катион соли). Большое значение для биосинтеза ферментов имеет сбалансированность питательной среды по углероду и азоту. Источником витаминов и ростовых веществ в питательных средах обычно являются микробные массы и различные растительные отходы. Большое влияние на синтез ферментов оказывает присутствие в среде минеральных элементов, которые необходимы микроорганизму в макро- и микроколичествах. Фосфор и сера входят в состав важнейших веществ клеток – нуклеотидов, белков, липидов, витаминов. Фосфор участвует во многих реакциях обмена веществ в клетке, стимулирует биосинтез протеаз, амилаз, пектолитических ферментов. Такие элементы, как железо, цинк, медь, кобальт и некоторые другие, требуются для синтеза ряда ферментов и белков в ничтожно малых количествах. Повышенное содержание микроэлементов часто приводит к торможению нормального роста и жизненных процессов клетки. Большая часть микроэлементов вносится в среду с водой и органическими добавками – с мукой, кукурузным экстрактом, жмыхом и т. д. Макроколичества минеральных элементов могут быть введены в состав среды, но необходимо учитывать, что минеральные соли содержаться в естественных продуктах, входящих в состав сред.
Очень часто в среды вносят мел, который связывает образующиеся кислоты, за счет чего происходит регулирование кислотности среды, а также служит дополнительным источником микроэлементов. Металлы и их комплексные соединения являются биологически важными компонентами. Микроэлементы могут регулировать обменные процессы в организме и изменять направление ферментативных реакций.
Присутствие или отсутствие отдельных микроэлементов может оказывать стимулирующее действие на накопление в среде определенных ферментов. Варьируя состав среды с учетом физиологических особенностей продуцента и индуцированного характера синтезируемых ферментов, можно получить поверхностную культуру, содержащую желаемый комплекс ферментов.
Поможем написать любую работу на аналогичную тему