При микроскопическом исследовании прежде всего определяют густоту и подвижность (активность) спермиев. По густоте спермы ориентировочно устанавливают насыщенность ее спермиями, относя к густой (Г), средней (С) или редкой (Р). У быков оценка Г ставится, если все поле зрения микроскопа заполнено спермиями и в пространстве между ними не укладывается длина одного спермия. Средней считают сперму, когда между спермиями хорошо выражены промежутки, равные приблизительно длине спермиев. В редкой сперме расстояние между спермиями превышает их длину.
Сложнее определять густоту спермы производителей с маточным типом осеменения, так как у них секреты придаточных желез очень сильно разбавляют спермиев. У всех видов животных оценка по густоте не позволяет точно установить насыщенность спермы спермиями, поэтому с переходом на использование разбавленной спермы при оценке эякулята определяют концентрацию спермиев.
К использованию допускают сперму быков, хряков и жеребцов с оценкой Г и С, а у баранов — только Г.
Подвижность спермиев оценивают по 10балльной системе. Каждый балл равен 10 % спермиев, обладающих поступательным движением. Если спермин имеют манежное движение (по кругу) или только колеблются, качество спермы оценивают буквой К (колебательное движение). Сперму с неподвижными спермиями обозначают буквой Н (некроспермия).
Подвижность неразбавленной спермы быка определяют при температуре 40 °С. На теплое предметное стекло наносят каплю спермы и 2—4 капли 3%ного раствора цитрата натрия, перемешивают, накрывают покровным стеклом и просматривают не менее трех полей зрения. Поскольку оценка спермиев по подвижности достаточно субъективна, то для контроля в необходимых случаях можно определять количество живых и мертвых спермиев.
При оценке спермы на густоту и подвижность спермиев применяют комплексное обозначение, позволяющее удобно отражать ее качество. Например, Г10 баллов означает, что исследуемая сперма густая и 100 % спер миев обладают головным прямолинейным движением; Г9 баллов означает 90%, 8 — 80, Г7 —70% подвижных спермиев и т. д.
Концентрацию сперми е в (количество в 1 мл эякулята) наиболее точно определяют в счетной камере Горяева или другого автора (см. Практикум по акушерству). Это один из основных показателей качества спермы, на который ориентируются при разбавлении эякулята.
Для определения концентрации спермиев жеребцов Г. В. Паршу тин и Е. В. Румянцева сконструировали специальные стандарты. Они представляют собой запаянные пробирки, содержащие жидкость, имеющую цвет, соответствующий той или иной известной концентрации спермы. Для определения концентрации исследуемую сперму наливают в пробирку с диаметром стандартных пробирок, устанавливают рядом с ней пробирки стандарта и подбирают наиболее подходящий по виду стандарт, на котором отмечено количество спермиев в 1 мл спермы.
В настоящее время станции искусственного осеменения пользуются фото электроколориметрическим методом, основанным не на прямом подсчете спермиев, а на учете степени оптической плотности спермы, т. е. мутности. Этот метод позволяет быстро (2—3 мин) определить концентрацию спермиев в сперме, но так как фотоэлектроколориметр создан для анализа истинных растворов, а сперма является взвесью и в ней содержится большее или меньшее количество эпителиальных и других клеток, то результат нередко может быть неточным.
Для получения более точных результатов М. П. Рязанский разработал прямой метод подсчета числа спермиев в сперме на скоростном (за 37—40 с) автоматическом счетчике клеток — целлос копе. С этой целью можно использовать и венгерский прибор «Пикоскель».
Определение количества мертвых спермиев. В. А. Морозов предложил использовать красители, которые окрашивают спермиев только мертвых и с колебательными движениями. Самый простой способ окраски спермы быков следующий. Исследуемая сперма должна иметь концентрацию спермиев 0,2—0,4 млрд/мл, при более высокой концентрации эякулят разбавляют 3%ным раствором цитрата натрия до указанного показателя. Готовят 1—5%ный раствор эозина водорастворимого на 3%ном растворе лимоннокислого натрия. На чистое обезжиренное теплое (35 ± 2 °С) предметное стекло наносят каплю спермы, добавляют 2—3 капли краски, подогретой до 30 °С, смешивают 2—4 с и делают три тонких мазка, которые высушивают. В каждом препарате подсчитывают 100— 150 спермиев, отдельно учитывая количество с окрашенными и неокрашенными головками.
Определение содержания патологических форм спермиев и включений спермы у быков проводят в мазках, окрашенных азурэозином или другими красителями, где подсчитывают 100—200 спермиев и различные включения. Среди нормальных спермиев всегда находится более или менее значительное количество патологических форм. Чаще аномалии выявляются в хвостовой части спермиев, основании головки и шейки. С возрастом к моменту физиологической зрелости производителя количество аномальных спермиев уменьшается. Могут встречаться самые различные патологические формы спермиев: гигантского размера или карликовые, спермии с двумятремя головками, но общим хвостом, с двумя хвостами, с укороченным хвостом, его деформацией или отсутствием, с цитоплазматической капелькой, слишком большой или маленькой головкой и другие формы. Иногда встречаются спермии, лишенные головки, но способные двигаться
Большое количество патологических спермиев свидетельствует о нарушении спермиогенеза, о вредном влиянии патологически измененных секретов придаточных половых желез и мочевых путей или, наконец, указывает на нарушение правил получения спермы и ее хранения во внешней среде от выделения до исследования.
В качестве конкретных причин образования уродливых форм спермиев отмечают: слабо развитые семенники; поражения семенника и придатка (гигантские и карликовые спермии); длительные промежутки между коитусами, обусловливающие старение и распад спермиев в придатке (отдельные головки, изолированные хвосты); половое истощение производителя вследствие большой половой нагрузки или недостаточного кормления (спермии с цитоплазматическими капельками в области шейки, тела и хвоста — незрелые спермии). Чем ближе к головке расположена капелька, тем моложе спермий.
Большое значение в образовании патологических форм спермиев придается нарушению терморегулирующей функции мошонки.
Закручивание хвостов спермиев в сторону происходит при смешивании спермы с гипотоническим раствором (неправильная подготовка разбавителей, попадание воды).
При микроскопическом исследовании спермы выявляются следующие включения: клетки плоского, переходного эпителия, клетки семенных канальцев (зернистые); форменные элементы крови — эритроциты и лейкоциты; гиалиновые шары, круглые или овальные, иногда слоистые и напоминающие зерна крахмала, амилоидные тельца, сильно блестящие — лецитино вые зернышки, кристаллы спермина и др. Если примесей в сперме мало, это считается нормой. Если примесей много, необходимо выявить их источник и причину.
Значительное количество патологических спермиев следует безусловно расценивать как признак наступающей импотенции.
Дегидрогеназная активность спермы быка определяется скоростью обесцвечивания метиленовой сини в капиллярах или в пробирках (метод Н. П. Шер гина). Первый вариант получил более широкое распространение в практике. На предметное стекло, подогретое до 30—37 °С, наносят каплю спермы и добавляют теплой пипеткой каплю 0,01 %ного раствора метиленовой сини, подогретого до 30 °С. Капли тщательно перемешивают и набирают смесь в теплую (30—37 °С) стеклянную трубку длиной 5—6 см с внутренним диаметром 0,8—1 мм, чтобы высота столбика была2— 3 см. Заполненную смесью трубочку
кладут горизонтально на лист белой бумаги в термостат с температурой 37 ± 0,5 °С. Записывают время начала исследования и окончания обесцвечивания метиленовой сини. Дегидрогеназ ную активность спермы (Да) в условных единицах вычисляют по формуле
Да = Пс/С/10,
где Пс — подвижность спермиев, баллы; /—время обесцвечивания метиленовой сини в опыте, мин; С — концентрация спермиев, млрд/мл; 10 — постоянный коэффициент.
Все исследования спермы проводят при строгом соблюдении действующих стандартов и инструкций по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных.
В результате исследования могут быть установлены следующие недостатки:
асперматизм (Азм) — отсутствие спермы;
олигосперматизм (Озм) — малый объем эякулята;
аспермия (А) — отсутствие в сперме спермиев;
олигоспермия (О) — недостаточное число спермиев в эякуляте;
некроспермия (Н) — мертвые спермин;
тератоспермия (Т) — патологические спермин и др.
Биологическая проба спермы. Решающее значение для оценки спермы имеет определение оплодотворяющей способности спермиев. Установлено, что она может быть выявлена только в отношении определенной группы самок, находящихся при конкретных условиях существования и времени осеменения. Оплодотворение зависит от степени родства самки и производителя, состояния их здоровья, упитанности, качества кормления и др. Поэтому для определения оплодотворяющей способности спермы лучше всего использовать здоровых ремонтных телок. Правильно поставленная биологическая проба спермы на здоровых животных — самый надежный критерий ее оценки. Все другие методы являются только косвенными, т. е. они позволяют лишь условно судить об оплодотворяющей способности спермы. Сперма считается нормальной, если оплодотворяемость от первого осеменения составляет не менее 70—75 %. Быки с пониженной оплодотворяющей способностью спермы дают маложизненное потомство, и их нельзя использовать ни при искусственном, ни при естественном осеменении. На основа нии учета итогов этих осеменений устанавливают индивидуальную нагрузку.
Макроскопическое исследование.
результаты его служат предпосылкой для тщательного микроскопического исследования спермы, которое позволяет установить качество спермы, а также причины изменения ее внешнего вида.
Исследование спермы начинают с определения ее объема с помощью мерной пипетки, градуированного цилиндра или мензурки. Можно определять массу эякулята взвешиванием на лабораторных весах с погрешностью не более ±0,08 г ).
Цвет, нормальной спермы белый или белый с желтым оттенком. Сероватый или голубоватый оттенок — признак олигоспермии (недостаточное число спермиев). Интенсивный желтый цвет обычно указывает на примесь мочи. Розоватый или красноватый — признак примеси крови, как следствие свежей травмы. Бурокрасный указывает на глубокую травму половых путей давнего происхождения. Зеленоватый оттенок сперма приобретает от примеси гноя. Хлопья в сперме наблюдаются при воспалении пузырьковидных желез.
Запаха нормальная сперма не имеет или обладает легким запахом жиропота. При хронических, гнойных процессах в семенниках или в придаточных половых железах сперма может иметь гнилостный запах.
Консистенция спермы быка сливкообразная, барана — метанообразная, жеребца и хряка — сходная с молоком.
Поможем написать любую работу на аналогичную тему