1. Исследуемую бактерию подвергают действию мутагенного фактора, желательно широкого спектра действия (например, ультрофиолет).
2. Выращивают обработанные клетки в питательном бульоне, чтобы выявить возникшие мутации. Если нужно получить ряд независимых мутаций, следует перед выращиванием поделить культуру на несколько порций.
3. Высевают необходимые разведения в чашки Петра с питательным агаром и инкубируют чашки вверх дном при температуре 37 градусов.
4. По достижении колониями размера около 3 мм в диаметре переносят их в чашки с минимальным агаром и питательным агаром. Когда колонии вырастают, выявляют те из них, которые есть на питательном агаре, но отсутствуют на минимальном ашаре.
На этой стадии методика позволяет выявить лишь всю совокупность ауксотрофов; пока нельзя ответить на вопрос, какие именно изменения произошли в тех или иных конкретных звеньях обмена веществ ауксотрофов. Чтобы идентифицировать различные типы ауксотрофов, выполняют следующие дополнительные этапы.
5. Отбирают выявленные колонии ауксотрофов с помощью стерильных зубочисток, размазывают массу клеток пятнами размером 0,6 см в диаметре каждое в чашках с питательным агаром и инкубируют при температуре 37 градусов. В каждой чашке должно находиться по 40-50 пятен.
6. Переносят клоны, выросшие из пятен, на минимальный агар с добавками метаболитов в девяти различных комбинациях и без добавок.
7. Определяют, при наличии каких наборов метаболитов растет обнаруженный мутант. Эти данные дают возможность сделать вывод о природе нарушения, вызванного мутацией. Затем, чтобы убедиться в правильности предварительных выводов, проверяют рост каждого клона на минимальном агаре с той добавкой, от которой, как предполагают, зависит данный ауксотроф.
Поможем написать любую работу на аналогичную тему