Цель клеточной и генной инженерии – получение трансгенных организмов. Это направление стало развиваться с 60-ых годов 20 в., когда стало получать отдельные гены:
1. Выделение изолированного гена из клетки с помощью λ и φ80 фагов. Для этого произвели денатурацию генов и смешали их образовался дуплекс. Ввели нуклеазу, она вырезала хвосты, а лактозный оперон оказался в чистом виде.
2. Химический синтез гена: 1976 г. удалось произвести химический синтез гена аланиловой т-РНК, которая содержала 76 пар нуклеотидов. Работу производил Корана, но ген не работал, не хватало промотора и оператора. Следующая работа: синтезировали тирозиновую т-РНК – ввели регуляторные области, фаг Т4 и он заработал.
3. Синтез гена с помощью обратной транскриптазы (РНК-зависимая ДНК-pol). Явление обратной транскрипции установили Темин и Балтимор в клетках опухоли у кур (Саркома Рауса). Возбудитель заболевания – ретровирус, содержащий РНК в качестве генетического материала. На РНК синтезируется ДНК, затем РНК отщепляется, а ДНК синтезирует себе подобную, образуется двойная цепочка, встраивающаяся в хромосому хозяина.
4. С помощью ферментов рестриктаз (рестрикция ограниченная) – одноцепочечная и двухцепочечная ДНК. Среди рестриктаз двойной цепи есть три типа:
1. Узнающие сайт и делающие разрез недалеко от него, но не в специфическом участке
2. Узнающие сайт (последовательность нуклеотидов) и делающие разрез внутри области
3. Узнающие сайт и делающие разрез ДНК в определенном участке рядом с сайтом узнавания
В клетке рестриктазы-синтазы уничтожают чужеродную ДНК, поэтому рестриктазы разрезают ДНК на фрагменты. В клеточной ДНК есть защита от собственных рестриктаз. Сайты модифицируются и рестриктазы их не узнают. Если в клетку войдет вирус, то рестриктазы модифицируются и клетка лизируется.
Для выделения нужного гена, ДНК режут рестриктазами, с образованием фрагментов с мелкими концами. Последние способны комплементарно замыкаться. У плазмиды рестриктаза разрезает сайт и встраивает участок. Такую плазмиду переносят в клетку. Новая плазмида приобретает устойчивость к новом антибиотику.
Типы переноса генов.
1. Гомологический – гены переносят в пределах одного типа клеток (от эу- к прокариотам). Ген из азотобактера перенесли в Е. Coli и она приобрела способность усваивать азот.
2. Гетерологический – (из про- в эукариоты) ген лягушки РНК перенесли в Е. Сoli, она начала осуществлять транскрипцию и образовались субъединицы рибосом типа эукариот.
Генная инженерия.
Связанные с пересадкой хромосом из одной клетки в другую. Гердон пересаживал ядра головастиков лягушки и получал животных с чужой генетической информацией.
Вытесненные виды хромосом.
Крыса х мышь → крыса
Человек х мышь → человек
Человек х уссурийский хомячок → человек
Мул х мышь → мул
Поможем написать любую работу на аналогичную тему