Трансляция — синтез полипептидной цепи с использованием мРНК в роли матрицы. Как и транскрипция, трансляция — сложный многостадийный процесс, требующий значительных затрат энергии и участия большого числа (до 300) вспомогательных молекул. В трансляции участвуют все три основных типа РНК:
м-, р- и тРНК. мРНК является информационной матрицей; тРНК “подносят” аминокислоты и узнают кодоны мРНК; рРНК вместе с белками образуют рибосомы, которые удерживают мРНК, тРНК и белок и осуществляют синтез полипептидной цепи. Процесс трансляции основывается на том, что каждому триплету мРНК (кодону) соответствует определенная аминокислота. Генетический код расшифровывают (реализуют) тРНК. Напомним, что тРНК имеет структуру, состоящую из четырех петель. К одной из них присоединяется аминокислота (акцепторная петля), в противоположной (антикодоновой) находится триплет нуклеотидов, комплементарный кодону мРНК. Этот триплет называют антикодоном. Так, аминокислоте триптофану соответствует кодон УГГ в мРНК, триптофановая тРНК имеет антикодон АЦЦ.
Транскрипция состоит из подготовительного и трех основных этапов. Подготовительный этап. На этом этапе происходит образование аминоацил-тРНК — присоединение аминокислоты к соответствующей тРНК. Эти реакции протекают в цитоплазме и осуществляются ферментами аминоацил-тРНК-синтетазами. Именно эти ферменты контролируют соответствие аминокислоты типу тРНК (ее антикодону).
1. Инициация. Происходит образование цельной рибосомы, присоединение мРНК и установление первой аминокислоты. Напомним, что каждая рибосома состоит из двух субъединиц — малой и большой. В нерабочем состоянии они обычно не связаны друг с другом (говорят, что рибосома диссоциирована). В процессе же трансляции рибосомы находятся в “собранном” состоянии. В цельной рибосоме выделяют участок присоединения тРНК, “нагруженной” аминокислотой (то есть аминоацил-тРНК) — акцепторный (А-сайт) и участок удержания тРНК с растущей полипептидной цепью — пептидильный (Р-сайт) (в молекулярной биологии выражение “участок цепи” часто заменяют термином “сайт”). Непосредственной связи между мРНК и растущей белковой цепью нет — она осуществляется через тРНК. Во время инициации (при участии трех вспомогательных белковых факторов) происходит связывание мРНК с малой субъединицей рибосомы, затем к первому кодону своим антикодоном присоединяется “груженая” (несущая аминокислоту) тРНК, а после этого к образовавшемуся комплексу присоединяется большая субъединица рибосомы. Интересно, что первой аминокислотой всех белков у эукариотических организмов всегда является метионин, а у прокариот — формилметионин.
2. Элонгация. Ко второму кодону (в А-сайт рибосомы) присоединяется еще одна аминоацил-тРНК. Между карбоксильной группой (-СООН) первой аминокислоты и аминогруппой (-NH,) второй образуется пептидная связь. После этого первая аминокислота отсоединяется от своей тРНК и “повисает” на соединенной с ней аминокислоте второй тРНК. Пустая первая тРНК освобождается из комплекса с рибосомой, и Р-сайт становится незанятым. Рибосома “делает шаг” вдоль мРНК. При этом тРНК с аминокислотами перемещается из А-сайта в Р-сайт. “Шаг” рибосомы всегда строго определен и равен трем нуклеотидам (кодону). Движение рибосомы вдоль мРНК называется транслокацией. Как репликация и транскрипция, транслокация всегда осуществляется в 5' — 3' направлении мРНК.
3. Терминация. Синтез полипептидной цепи идет до тех пор, пока рибосома не достигнет одного из трех стоп-кодонов. В этот момент белковая цепь отделяется, а рибосома диссоциирует на субъединицы. Практически все белки по окончании своего синтеза подвергаются созреванию или процессингу — реакциям посттрансляционных модификаций. После этого они (в основном по “трубопроводу” эндоплазматической сети) транспортируются к месту своего назначения.
Характерно, что мРНК транслируется не одной, а одновременно несколькими (до 80) рибосомами. Такие группы рибосом, осуществляющие синтез белка на одной молекуле мРНК, называют полисомами. В результате этого резко увеличивается “производительность” трансляции в единицу времени.
Энергетика трансляции
На включение одной аминокислоты в растущую полипептидную цепь затрачивается энергия, соответствующая расщеплению 4 молекул АТФ до АДФ. Однако эффективно (на узнавание аминокислоты и образование пептидной связи) используется лишь около 10 % выделяющейся энергии, остальная же ее часть рассеивается в виде тепла. Использование меньших количеств энергии ведет к тому, что трансляция идет медленно, с ошибками и ненадежно. Здесь, как и везде, качество (точность реализации информации) и скорость “покупаются” за счет количества (избыточная энергия) — за всякое возрастание упорядоченности приходится платить, об этом гласит второй закон термодинамики.
Транскрипция (от лат. transcriptio — переписывание) — процесс синтеза РНК с использованием ДНК в качестве матрицы, происходящий во всех живых клетках. Другими словами, это перенос генетической информации с ДНК на РНК.
Транскрипция катализируется ферментом ДНК-зависимой РНК-полимеразой. Процесс синтеза РНК протекает в направлении от 5'- к 3'- концу, то есть по матричной цепи ДНК РНК-полимераза движется в направлении 3'->5'
Транскрипция состоит из стадий инициации, элонгации и терминации.
Инициация транскрипции — сложный процесс, зависящий от последовательности ДНК вблизи транскрибируемой последовательности (а у эукариот также и от более далеких участков генома — энхансеров и сайленсеров) и от наличия или отсутствия различных белковых факторов.
Момент перехода РНК-полимеразы от инициации транскрипции к элонгации точно не определен. Три основных биохимических события характеризуют этот переход в случае РНК-полимеразы кишечной палочки: отделение сигма-фактора, первая транслокация молекулы фермента вдоль матрицы и сильная стабилизация транскрипционного комплекса, который кроме РНК-полимеразы включает растущую цепь РНК и транскрибируемую ДНК. Эти же явления характерны и для РНК-полимераз эукариот. Переход от инициации к элонгации сопровождается разрывом связей между ферментом, промотором, факторами инициации транскрипции, а в ряде случаев — переходом РНК-полимеразы в состояние компетентности в отношении элонгации (например, фосфорилирование CTD-домена у РНК-полимеразы II). Фаза элонгации заканчивается после освобождения растущего транскрипта и диссоциации фермента от матрицы (терминация).
На стадии элонгации в ДНК расплетено примерно 18 пар нуклеотидов. Примерно 12 нуклеотидов матричной нити ДНК образует гибридную спираль с растущим концом цепи РНК. По мере движения РНК-полимеразы по матрице впереди нее происходит расплетание, а позади — восстановление двойной спирали ДНК. Одновременно освобождается очередное звено растущей цепи РНК из комплекса с матрицей и РНК-полимеразой. Эти перемещения должны сопровождаться относительным вращением РНК-полимеразы и ДНК. Трудно себе представить, как это может происходить в клетке, особенно при транскрипции хроматина. Поэтому не исключено, что для предотвращения такого вращения двигающуюся по ДНК РНК-полимеразу сопровождают топоизомеразы.
Элонгация осуществляется с помощью основных элонгирующих факторов, необходимых, чтобы процесс не останавливался преждевременно.
В последнее время появились данные, показывающие, что регуляторные факторы также могут регулировать элонгацию. РНК-полимераза в процессе элонгации делает паузы на определенных участках гена. Особенно четко это видно при низких концентрациях субстратов. В некоторых участках матрицы длительные задержки в продвижении РНК-полимеразы, т. н. паузы, наблюдаются даже при оптимальных концентрациях субстратов. Продолжительность этих пауз может контролироваться факторами элонгации.
У бактерий есть два механизма терминации транскрипции:
ро-зависимый механизм, при котором белок Rho (ро) дестабилизирует водородные связи между матрицей ДНК и мРНК, высвобождая молекулу РНК.
ро-независимый, при котором транскрипция останавливается, когда только что синтезированная молекула РНК формирует стебель-петлю, за которой расположено несколько урацилов (…УУУУ), что приводит к отсоединению молекулы РНК от матрицы ДНК.
Терминация транскрипции у эукариот менее изучена. Она завершается разрезанием РНК, после чего к её 3' концу фермент добавляет несколько аденинов (…АААА), от числа которых зависит стабильность данного транскрипта.
Основной постулат молекулярной генетики: генетическая информация передается с молекулы ДНК на мРНК (транскрипция), а затем с мРНК (иРНК) к белкам (трансляция); Ц.д. выдвинута в 1958 Ф.Криком, постулировавшим необратимость этого двухступенчатого процесса; в настоящее время необратимость первого этапа процесса опровергнута (РНК-зависимый синтез ДНК).
Поможем написать любую работу на аналогичную тему