Стратегия клонирования и экспрессия чужеродной генетической информации в клетках различных организмов

Разработаны системы клонирования в дрожжах, грибах, растениях и млекопитающих.

Клонирование в дрожжах. S. cerevisiae. У этого вида в гаплоидных клетках содержи 17 хромосом, в их составе идентифицировано несколько  генов. Большинство штаммов дрожжей содержат автономно реплицирующуюся кольцевую ДНК.Плазмида Scp cerevisiae содержит около 6300 пар оснований и имеет 50 копий на клетку. Ее гибриды с плазмидами обычно и использу в  качестве векторов. Они  могут расти в жидкой среде и давать колонии на твердой среде, короткое время регенерации (несколько часов) вследствие малого размера генома.

Клонирование в клетках животных.

Предварительно клонированные гены вводят в клетку животных различными путями. Суть одного состоит в трансформации клеток требуемым геном, соединенным с одним из генов, для которых осуществляется селекция. Для идентификации и последующего размножения клеток, содержащих интегрированную ДНК, был разработан метод, получивший название метода маркера.

Селективные маркеры дают возможность вводить в клетки млекопитающих любой ген, заранее лигированный с клонированным селективным маркером.

Для трансформаций- генов в геном животного используют следующие приемы: микроб инъекцию ДНК в пронуклеус зигот или в каждый бластомер  двухклеточного эмбриона; введение ДНК с помощью ретровирусныгс векторов; получение трансгенных химер из генетически, трансформированных клеток и эмбрионов. наиболее распространенный метод — микроинъекция ДНК. осуществляют с помощью специальной пипетки (внутренний диаметр ее около 1 мкм), а количество инъецированного раствору ДНК составляет 1 — 2 пкл. После инъекции ДНК эмбрионы культивируют до момента пересадки реципиентам. После небольшого культивирования in vitro проинъецированные эмбрионы переносят в яйцеводы (хирургическим путем) реципиентов. Используй методы блот-анализа,  и ПЦР, можно получит доказательства интеграции и экспрессии ДНК у трансгенных животных.