После создания in vitro гибридных ДНК, их необходимо ввести в пермиссивные клетки (обеспечивающие репликацию этих молекул). Процесс проникновения ДНК в клетку и возникновение у неё наследственных изменений называют трансформацией. Для этого используют как рассмотренные выше векторы (реплицирующиеся внехромосомно), так и молекулы ДНК, интегрирующиеся в геном клетки (линейные и кольцевые молекулы ДНК). Трансформированные клетки называют трансформантами. Но зачастую клетки не способны поглощать нуклеиновые кислоты из окружающей среды, поэтому приходится индуцировать их, переводя в состояние компетенции. Разные типы клеток требуют разные способы индукции у них компетентного состояния, что связано с особенностями строения клеточных стенок и плазматических мембран.
Исторически первым подходом к получению компетентных клеток является ферментативное расщепление клеточных стенок, приводящий к удалению физического барьера на пути проникновения ДНК в клетку. В 1982 г. Т.Вонг и Е.Нейман с сотрудниками для введения молекул ДНК в клетки мыши применили метод, названный электропорация. Позже метод усовершенствовали и стали применять на всех видах клеток. В основе метода лежит кратковременное воздействие электрического поля высокой напряжённости (1-15 кВ/см) на клеточную мембрану, что приводит к образованию в ней пор (электропробой). Во время воздействия поля из внешней среды молекулы ДНК попадают в клетку под действием осмотических сил. Электропорация – наиболее простой, эффективный метод введения молекул ДНК в клетки, и постепенно он стал наиболее применяемым в генетической инженерии.
Разработка простых, эффективных методов введения молекул ДНК в пермиссивные клетки является необходимым условием успешного развития работ по клонированию чужеродной генетической информации в клетках любого типа. Поэтому данному направлению исследований уделяется пристальное внимание, и оно постоянно развивается.
Поможем написать любую работу на аналогичную тему