Перенос генов с помощью транспозонных векторов, как и в случае использования ретровирусов, имеет определенные преимущества. Здесь интеграция генов происходит с использованием сайт-специфических транспозаз, что предохраняет чужеродные гены от перестроек и делает экспрессию и регуляцию внесенных генов более контролируемой.
Впервые такой способ переноса чужеродных генов в зародышевые клетки был предложен для дрозофил (Spradling, Rubin, 1982). Авторы использовали для этой цели Р-элемент, делегирование центральной части которого не блокирует его способности к транспозиции в присутствии Р-элемента-помощника. Это позволяет внедрять в него фрагменты ДНК размером в несколько десятков тысяч пар нуклеотидов. Транспозазная активность Р-элемента проявляется только в зародышевой ткани и только, если в ее клетках нет резидентного транспозона. Поэтому местом для введения генов был выбран постериорный коней оплодотворенной яйцеклетки на стадии после нескольких делений ядра, поскольку именно там формируется зародышевая ткань.
Апробирование метода было проведено на мушках М-типа (в них Р-элемент отсутствует), гомозиготных по мутантному гену rosy. Особи с такой мутацией имеют коричный цвет глаз вместо красного, так как ген rosy кодирует ксантиндегицрогеназу, участвующую в синтезе предшественника пигмента. Р-элемент был клонирован в плазмиде pBR322 (образовалась плазмида pπ25.1), и в него был вставлен ген rosy+ (плазмида рrу- 1). Обе плазмиды ввели в оплодотворенную яйцеклетку, где Р-элемент мигрировал из плазмиды в хромосомные сайты. До половины мух, развившихся из обработанных эмбрионов, дали потомство с измененным цветом глаз. Молекулярный анализ показал, что перенесенные сегменты ДНК с геном rosy+ (около 10 т.п.н.) находятся в Р-элементах без каких-либо перестроек .
Поможем написать любую работу на аналогичную тему