Термин «культура клеток, тканей и органов растений» применяется к асептически выращиваемым частям растения: изолированным зародышам, изолированным органам (кончики корней, меристемы побегов, части молодых цветков и плодов), каллусной ткани, суспензионной культуре, культуре протопластов.
Для генетических и физиологических исследований ценным является культивирование одиночных клеток.Для того что бы заставить одиночные клетки делится разработаны методы: 1. Метод ткани-«няньки» – кондиционирующий фактор выделяется находящимися рядом с одиночной клеткой кусочками ткани-«няньки».
2. Метод «кормящего слоя» – кондиционирующий фактор выделяют активно делящиеся клетки суспензионной культуры того же вида растений, что и одиночная клетка. 3. Кондиционирование среды путем добавления питательной среды
от интенсивно делящейся культуры клеток.
4. Метод культивирования одиночных клеток в микрокапле, т.е. очень малом объеме (~20 мкл) богатой, оптимально сбалансированной по составу питате среды.
При культивировании in vitro пыльников или микроспор, а также незрелых семяпочек возможно получение гаплоидных растений . Этот феномен связан с переключением развития спорогенных клеток с обычного для них гаметофитного пути развития на другой – спорофитный путь. Процесс образования гаплоидного растения (спорофита) из микроспоры или клеток пыльцевого зерна называется андрогенез.
гаплоидные растения при андрогенезе могут образовываться из микроспор,из пыльцевого зерна, содержащего вегетативную и генеративную клетки, то возможны 4 пути андрогенеза:
1 Микроспора делится на 2 идентичные дочерние клетки, которые способны к спорофитному развитию. не происходит формирования вегетативных и генеративных клеток.
2 Микроспора в рез-те неравного деления образует вегетативную и генеративную клетки. Спорофиты возникают в результате дальнейшего развития вегетативной клетки, а генеративная клетка дегенерирует.
3 Эмбриоиды формируются только из генеративной клетки. В таких случаях вегетативная клетка совсем не делится, либо делится до известного предела.
4 в рез-те деления одноядерной микроспоры образуются вегетативная и генеративная клетки, которые в дальнейшем делятся и участвуют в развитии спорофита.
2 метода получения гаплоидных клеток in vitro:
1методы культуры пыльников т.е на питательной среде культивируются изолированные пыльники
2 методы культуры пыльцы соматические ткани пыльника удаляются.
Процесс получения гаплоидных кл методом культуры пыльников:
1.стерилизации бутонов.2. препарирование 3. перенос на среду для
культивирования. Культивирование пыльников проводят на жидких, полужидких и
комбинированных средах.
Формирование эмбриоида из микроспоры длится от 3 до 10 недель.
идентификация. Основными причинами образования негаплоидных растений являются:
слияние ядер при первых делениях микроспоры; образование регенерантов из негаплоидных клеток стенки пыльника; образование регенерантов из негаплоидной пыльцы, может образовываться у некоторых видов при нормальных условиях с низкой частотой; мутации в начале эмбриогенного развития.
Гаплоидные растения идентифицируются по морфологическим признакам, а также с помощью цитогенетических методов – подсчета числа хромосом в делящихся клетках кончика корня и т.д.
Методы отделения пыльцы от самотич тк пыльника: 1. Спонтанное освобождение. 2. Гомогенизация и фильтрация.3. разрезание пыльника.
Поможем написать любую работу на аналогичную тему