Нужна помощь в написании работы?

         Бумажная хроматография – метод анализа состава исследуемого образца. Он был открыт в 1944г. Констоном, Гордоном, Мартином и Сенджем, которые использовали его для анализа смесей аминокислот. Мартин и Сендж впоследствии были удостоены Нобелевской премии за открытие распределительной хроматографии. В последующие 10 лет этот метод получил огромное распространение, но 1952г. бумажную хроматографию стал вытеснять новый метод – тонкослойная хроматография (являющийся, по сути, обобщением бумажной). Последний оказался эффективнее благодаря большей скорости эксперимента, пригодности для препаративных целей и более широким возможностям обнаружения. Поэтому сейчас бумажную хроматографию уже практически не применяют, а методы её давно не совершенствуются.

   Бумажная хроматография:

-распределительная

-адсорбционная

-ионообменная

-препаративная

-аналитическая

В распределительной бумажной хроматографии можно выделить нормальную и обращённо-фазную хроматографию. В последнем случае (в отличие от нормального подхода) неподвижная фаза более липофильна, чем подвижная. Этот метод применяется для разделения липофильных веществ.

Внимание!
Если вам нужна помощь в написании работы, то рекомендуем обратиться к профессионалам. Более 70 000 авторов готовы помочь вам прямо сейчас. Бесплатные корректировки и доработки. Узнайте стоимость своей работы.

Бумажная и тонкослойная хроматография может быть использована для количественного анализа смесей. Для этого на стартовую линию наносят в виде пятна или полосы точный объем раствора пробы известной концентрации. Нанесение раствора осуществляют микропипетками, микрошприцами или специальными приспособлениями. При нанесении пробы стремятся, чтобы в ней содержалось не менее 20-500мкг определяемого вещества (в зависимости от методики количественного определения). Затем хроматографируют и количественно определяют вещества в полученных пятнах и полосках. Используют несколько способов определения компонентов пробы:

а) по площади зон, полученных при хроматограмме.

б) по измерению физических и физико-химических свойств зон на хроматограмме.

в) экстрагированием зоны соответствующим растворителем и анализом экстракта.

Определение по площади зон основано на явлении насыщения слоя адсорбента или бумаги веществом. Каждый тип адсорбента имеет определенную емкость и не может адсорбировать в единице массы больше определенного количества вещества. При хроматографировании неадсорбированная часть вещества переходит в подвижную фазу и поступает на свободные участки адсорбента, где адсорбируется. Вещество распределяется на хроматограмме на площади, пропорциональной его массе. Зависимость между массой вещества q и площадью пятна S на хроматограммах носит нелинейный характер и является логарифмической:   √S=algq+b, где a и b – коэффициенты.

    Эта зависимость линейна для количеств вещества от 1 до 80-100мкг. Кроме площади используют измерение ширины h и длины l пятна, произведение которых пропорционально логарифму количества вещества в пятне. В этом методе во избежание больших ошибок применяют стандартные растворы, определенные объемы  которых с помощью микропипетки наносят на хроматограмму, стремясь получить серию пятен с различными содержанием стандарта. На эту же хроматограмму наносят определенный объем раствора пробы. Проводят хроматографирование, подсушивают хроматограмму, обрабатывают ее раствором реактива, подсушивают и измеряют площадь зон. Измерение площади проводят планиметром. При отсутствии планиметра под хроматограмму подкладывают копировальную и миллиметровую бумагу, обводят по периметру пятно зоны карандашом и подсчитывают площадь (мм2) изображений пятен на миллиметровой бумаге. Строят калибровочный график зависимости площади зон от массы стандарта и по графику определяют массу компонента в растворе пробы. Ошибка метода измерения площади зон достигает 5-10%, поэтому метод используют для ориентировочных анализов.

         Более точен денситометрический метод определения веществ на хроматограммах (ошибка 1-2%). В методе денситометрии производят измерение оптического поглощения проявленной хроматограммы сканирующим лучом в проходящем или отраженном свете на специальных приборах – денситометрах. На денситограмме получают пики, площадь которых пропорциональна содержанию веществ в пятне. Построив с помощью стандартов калибровочный график, измеряют площадь пика компонента и по графику определяют его массу в пробе. Получает развитие также спектрофотоденситометрическое  и флюориметрическое определение веществ на хроматограммах. В первом случае используют специальные спектрофотоденситометры, измеряющие поглощение вещества в монохроматическом свете, во втором измеряют флюоресценцию пятна при облучении хроматограммы УФ-светом.

         Широкое распространение получил способ экстрагирования компонентов  из зон подходящим растворителем. При применении этого способа на хроматограмму наносят стандартный раствор пробы. После получения хроматограммы производят ее обработку, детектирую зону стандарта, вырезают часть хроматограммы с зоной компонента пробы и производят его экстрагирование подходящим растворителем. Полученный раствор анализируют инструментальным методом, имеющим высокую чувствительность. Чаще всего применяют спектрофотометрические и фотоколориметрические методы. Если вещество не имеет цвета или не обладает поглощением в УФ-области, с экстрактом  проводят фотометрическую реакцию, позволяющую получить интенсивно поглощающее производное вещества.

        Бумажная и тонкослойная количественная хроматография обладает важным преимуществом по сравнению со многими другими методами анализа – высокой чувствительностью. Этими методами модно определить 10-20мкг вещества с точностью 5-7%.

Поделись с друзьями