Особенности экспрессии клонированных эукариотических генов в клетках E. coli.

Универсальность генетического кода подразумевает, что в прокариотической клетке возможна транскрипция и трансляция любой последовательности, при условии сигналов инициации и терминации транскрипции и трансляции, правильно узнаваемых прокариотической клеткой.

Так как большинство эукариотических генов раздроблены, они не могут быть в своем первичном виде экспрессированы в прокариотических клетках, где отсутствует система сплайсинга. Для преодоления данного препятствия используют зрелые матричные РНК, выделенные из эукариотических клеток, на основе которых с помощью обратной транскриптазы синтезируют комплиментарные цепи ДНК (кДНК), а затем на них достраивают комплиментарную цепь, получая двухцепочечные ДНК-копии мРНК. Такие фрагменты ДНК можно встраивать в подходящий вектор.

Гибридные гены – у которых кодирующая последовательность – эукариотическая, а сигналы инициации и терминации транскрипции и трансляции – бактериальные.

Экспрессирующие векторы E. coli делятся на 2 основные группы:

а) обеспечивающие экспрессию целевого полипептида в составе химерного белка;

б) обеспечивающие экспрессию индивидуального целевого белка.