Нужна помощь в написании работы?

Такие векторы используются для создания штаммов E. coli-продуцентов чужеродных белков (в том числе белков животных и человека), синтезирующих белок без добавления к нему каких-либо посторонних полипептидов.

Пример такого вектора – плазмида pAS, обеспечивающий эффективную, строго регулируемую транскрипцию встроенной последовательности, и может направлять синтез индивидуального чужеродного белка.

Этот вектор содержит сильный фаговый промотор PL, инициирующий транскрипцию чужеродного белка. Для обеспечения строгой регуляции транскрипции, следом за ним встроен терминатор транскрипции из фага лямбда – tR1. Транскрипция, инициируемая с PL, может преодолевать данный терминатор только при наличие в клетках E. coli белка-антитерминатора N фага лямбда. таким образом, инициируя образование в клетке белка N, можно «выключить» данный терминатор. Вслед за терминатором в векторе встроен участок связывания рибосом (SD-ATG). Участок узнавания рестриктазой BamHI расположен так, что данный фермент расщепляет плазмиду сразу за инициаторным ATG-триплетом. Это позволяет точно подстраивать белок-кодирующие последовательности под рамку считывания (обычноспомощью синтетических сегментов ДНК). После чужеродной вставки иммется еще один терминатор транскрипции. Его роль – поддерживать стабильность гибридной плазмиды в клетках бактерии, т.к. в его отсутствие интенсивная транскрипция с PL может подавить репликацию плазмиды с участка ori.

Сильный промотор: Although promoter regions have a consensus sequence that is the most common sequence at this position, some genes have "strong" promoters that bind the transcription machinery well, and others have "weak" promoters that bind poorly. These weak promoters usually permit a lower rate of transcription than the strong promoters, because the transcription machinery binds to them and initiates transcription less frequently.

Поделись с друзьями