Определение чувствительности бактерий к антибиотикам.

Определение чувствительности к антибиотикам методом бумажных дисков основано на диффузии антибиотика в питательную среду. Концентрация антибиотиков в дисках подобрана таким образом, чтобы диаметры зон задержки роста стандартных тест-организмов были 28 – 32 мм.

Бактерии исследуемого штамма (в стационарной стадии роста) высевают на поверхность агаризованной среды в чашке Петри и распределяют шпателем. Затем стерильным пинцетом на засеянную поверхность помещают на равном расстоянии друг от друга, от краев и центра чашки стандартные бумажные диски,

пропитанные растворами различных антибиотиков, выпускаемые промышленностью. Засеянные чашки выдерживают в термостате при температуре, оптимальной для роста исследуемых бактерий. Если бактерии чувствительны к данному соединению, то вокруг дисков образуется зона задержки роста. Диаметр зоны задержки роста соответствует степени чувствительности исследуемого микроорганизма к

данному антибиотику.

Метод серийных разведений антибиотика в жидкой питательной среде позв. путем определения минимальной ингибирующей концентрации (МИК) антибиотика колич. охарактеризовать его ак-сть в отношении исследуемых микроорганизмов. Для постановки эксперимента необходимы:

1. Питательные среды, обеспеч.опт.усл. роста и не содержащие в-в, инактивирующих антибиотик;

2. Растворы антибиотиков;

3. Культуры микроорганизмов, исследуемые на чувствительность к антибиотикам.

Работу начинают с приготовления растворов антибиотика. В ряд стерильных пробирок наливают по 2 мл жидкой полноценной питательной среды. В первую пробирку вносят 2 мл исходного раствора антибиотика (концентрация препарата – 500, 1000 мкг/мл) и тщательно перемешивают смесь. После этого 2 мл жидкости из первой пробирки переносят во вторую, повторяя перемешивание, далее 2 мл из второй пробирки переносят в третью и т. д. Из предпоследней пробирки 2 мл раствора антибиотика удаляют. При таком способеразведения в каждой пробирке будет содержаться по 2 мл раствора

антибиотика и в каждой последующей пробирке его концентрация будет в два раза меньше, чем в предыдущей. Среда в последней пробирке раствора антибиотика не содержит и является контрольной для роста культуры. После приготовления разведений во все пробирки вносят по 0,1 млвзвеси клеток с таким расчетом, чтобы в 1 мл содержалось 105 – 104 клеток.

Пробирки энергично перемешивают и помещают на 18 – 20ч. при опт.темп.. Учет результатов проводят двояко: вначале просматривают пробирки, чтобы по помутнению среды определить наличие роста микроорганизмов. Наименьшая концентрация антибиотика, при которой размножение микроорганизмов уже не происходит, а содержимое пробирок остается прозрачным, соответствует наименьшей инги-

бирующей концентрации данного антибиотика в отношении изучаемого микроорганизма и рассматривается как бактериостатическая, что означает задержку роста бактерий, но не наличие их гибели. Для определения бактерицидной концентрации исследуемого антибиотика в отношении изучаемого микроорганизма (это значит, концентрации препарата, в которой он вызывает гибель клеток) проводят посев бактериологической петлей из пробирок, содержимое которых не помутнело, на полноценную питательную агаризованную среду. Отсутствие роста свидетельствует, что в данной пробирке микроорганизмы полностью убиты данным антибиотиком.

Метод серийных разведений антибиотика в агаризованной среде удобен тем, что позволяет в одном опыте проверить чувствительность к данному антибиотику нескольких микроорганизмов. Разведения антибиотика готовят в стерильной агаризованной среде. Для этого в нее добавляют требуемое кол-во исходного раствора антибиотика, тщательно перемешивают и заливают в стерильные чашки Петри. После застывания агара дно чашки с наружной стороны делят маркером на стора. Каждую исследуемую культуру засевают штрихом с помощью бактериологической петли на отдельный стор в чашки с

разными концентрациями антибиотика. Чашки помещают в термостат при температуре, оптимальной для роста и развития изучаемых бактерий и инкубируют в течение 40 – 72 часов. Результаты учитывают по наличию или отсутствию роста бактерий в сравнении с ростом на среде в контрольной чашке. Бактериитсчитаются чувствительными к антибиотику в такой его концентрации, при которой их рост полностью подавляется.