Для их выделения в чашки Петри вносят питательный агар (10 мл), чтобы получился скошенный агар. После этого чашки ставят горизонтально и наливают в каждуюеще 10 мл агара с любым из антибиотиков в заданной концентрации (50, 100, 200 мкг/мл). В результате этого формируется градиент концентрации антибиотика от 0 мкг/мл на одном из краев чашки до максимальной – на другом.
По 0,1 мл культуры распределяют шпателем по поверхности агаризованной среды с градиентом концентрации антибиотика и инкубируют в оптимальных условиях. Отбирают устойчивые колонии и высевают на чашки с различными концентрациями антибиотика для оценки уровня устойчивости.
Прямой отбор широко используется для получения ревертантов (бактерий с обратными мутациями) ауксотрофных мутантов. Культуру ауксотрофных штаммов выращивают в полноценной среде до
поздней логарифмической стадии роста, центрифугируют и ресуспендируют в минимальной среде. Культуру засевают на поверхность агаризованной минимальной среды с помощью шпателя и стерильным пинцетом раскладывают диски из фильтровальной бумаги. На поверхность каждого диска наносят каплю одного из следующих растворов: стерильная вода (контроль); НГ, ЭМС и т. д. Чашки инкубируют, а о вызванных мутагенами обратных мутациях судят по росту колоний вокруг дисков. По полученной картине, зная специфичность мутагенов, можно определить природу исходных мутаций.
Для любой мутации, связанной с потерей генетической функции,требуются такие методы выявления, которые позволили бы идентифицировать очень редко возникающие мутантные клетки на большом
фоне немутантных. В эту группу входят ауксотрофные мутанты, мутанты с изменениями в сбраживании углеводов, морфологические и другие условно-летальные мутанты.
Поможем написать любую работу на аналогичную тему