Прямые
Подсчет клеток под микроскопом. Используются счетные камеры, капилляры Перфильева, препараты фиксированных и окрашенных клеток. Считаются все клетки – живые и мертвые. Ограничение – должна быть довольно высокая концентрация клеток в единице субстрата.
Счетные камеры. Лучше использовать для крупных объектов – дрожжи, грибы, водоросли.
Камера Горяева. – предметное стекло с углублением определенного объема, кот заполн суспензией с культурой. Сверху кладется покровное стекло с разметкой. Считают под микроскопом. Для точного счета общее число клеток должно быть не менее 600. по правилам нужно мерить три раза каждый раз заливая все заново. Кол-во клеток в 1 мл считается по формуле М=(a*10^3hS)*n, где M –общее число клеток , a – число клеток в подсчитаном квадрате, h – высота камеры, S – площадь квадрата сетки , n – разведение
Капилляр Перфильева. Для подсчета в естественных субстратах. Имеет прямоугольное сечение. Капилляр погужается в субстрат, заполняется, запаивается парафином и считается под микроскопом. Длинна отрезка капилляра равна полю зрения под микроскопом. Для достоверноести считаются разные отрезки.
Подсчет на фиксированных мазках (метод Виноградского) – используется для опр в оптически непрозрачных средах. Хорошо сохраняются. Нужно точный объем филигранно разложить по необходимой площади. Высушить зафиксировать покрасить. Смотреть с иммерсией.площадь поля зрения высчитывают объект-микрометром.
Подсчет на мембранных фильтрах. Для субстратов с низкой плотностью «населения» все то же самое.
удобно использовать люминесцентную микроскопию.
Взвешивание на весах. Для жидких сред. Сеют в среду, наращивают культуру, центрифугируют или фильтруют и высушивают. Измеряют сравнивая с пустым фильтром или пробиркой.
Косвенные методы.
Определение числа клеток путем высева. Используется для подсчета живых клеток в субстрате. Нельзя считать медленнорастущие культуры.
На чашке (метод Коха). Учет числа колоний и подсчет исходя из КОЕ. Обычно сеят 3 разведения на 3 чашки по 0,05 мл.
В жидкой среде. Если не растут на твердых. В пробирку со средой вноситься определенный объем субстрата из различных разведений. Исходя из концентраций в разведении, считаютгде выросло а где не выросло (слишком низкая концентрация) и вычисляют по таблице констант. Я непонимаю как это делают….
Определение оптической плотности – проще всего, но для жидких сред. В одну кювету наливается чистая среда, в другую- культура.
Поможем написать любую работу на аналогичную тему