Векторные системы для клонирования в клетках эукариот

 Векторные системы для клонирования в клетках эукариот.
В качестве векторов для переноса ДНК в эукариотические клетки используют дрожжевые плазмиды (единственные плазмиды, найденные в эукариотических клетках) и различные эукариотические вирусы (чаще всего ретровирусы, аденовирусы или аденоассоциированные вирусы). В ряде случаев введение векторных конструкций в эукариотические клетки осуществляют путем ко-трансформацый — одновременного введения плазмиды и сегмента чужеродной ДНК. В клетках эукариот векторные конструкции сохраняются в виде эписом (суперскрученных кольцевых молекул) в течение нескольких дней, а иногда экзогенная ДНК интегрируется в хромосомную ДНК и устойчиво сохраняется в геноме клетки-хозяина.
У дрожжей известны три вида плазмид, которые можно использовать в качестве векторов. Это 2m и 3m (длина соответственно 2 и 3 мкм), а также митохондриальная (длина 24 мкм) ДНК.
Первая плазмида найдена во многих штаммах дрожжей. Она представляет собой кольцевую молекулу ДНК (6318 пн), локализуется в ядре клетки и составляет около 3% всей дрожжевой ДНК (50-70 копий на гаплоидный геном). В природе эта плазмида не интегрируется в дрожжевые хромосомы. Лабораторные же варианты клеток, содержащих хромосомы с интегрированными в них 2-микронными ДНК, крайне не стабильны. Это объясняется несовместимостью механизма, регулирующего число копий плазмидной ДНК, с механизмом удвоения хромосом. Молекула 2- микронной ДНК содержит два инвертированных повтора -IR1 и IR2,включающих по 599 пн. В одном повторе находится ее ori-сайт. Его присутствие достаточно для автономной репликации плазмид, но в таком случае число копий невелико. Высокую копийность 2-микронной ДНК обеспечивают два плазмидных гена - REP1 и REP2 и локус REP3.
Между инвертированными повторами 2-микронной плазмиды in vivo происходит внутримолекулярная рекомбинация, зависящая только от плазмидного белка, кодируемого геном FLP. Область рекомбинации длиной приблизительно около 60 пн лежит около XbaI- сайта. Благодаря рекомбинации 2-микронная ДНК может существовать а двух формах (А и В) в соотношении 1:1. Малый EcoRI-фрагмент В-формы (2242 пн) содержит повтор IR1, ori-сайт, ген FLP и единственные сайты рестрикции (EcoRI, HindIII, BalI, BclI и ClaI), применяемые для клонирования и экспрессии гетерологичных генов. Поэтому его используют в качестве основы при конструировании дрожжевых векторов.
Эукариотические вирусы нашли более скромное применение в качестве векторов.
Практически используется только онкогенный вирус SV-40 и его производные.