Молекулярные векторы грамотрицательных бактерий на основе плазмид группы несовместимости IncQ - Молекулярные вектора (векторные системы). Лекции.

Среди экспрессирующих векторов группы несовместимости IncQ часто используются низкокопийные векторы, поскольку для высококопийных векторов часто наблюдается токсический эффект – суперсинтез кодируемого ими белка, вызывающий гибель клетки. Основой для таких векторов является плазмида RK2 – конъюгативная, стабильно поддерживающаяся в широком спектре грамотрицательных бактерий при низкой копийности. На ее основе создан плазмидный вектор pRK290. Этот вектор мобилизируется для переноса в разные виды грамотрицательных бактерий с помощью плазмиды-помощника (совместимой плазмиды) pRK2013, несущая в себе все дтереминанты конъюгационного переноса.

Векторные плазмиды, предназначенные для селекции фрагментов ДНК, способных выполнять функции промоторов. К таким относится плазмида pAF300, из группы IncP. Это репликон pKR290, содержащий ген cat (хлорамфениколацетилтрасферазы) – устойчивость к хлорамфениколу, но без собственного промотора. При встройке по участкам узнавания рестриктазами промоторсодержащих фрагментов ДНК, направляющих транскрипцию в сторону гена cat, фенотип, детерминируемые плазмидой, изменяется с TcrCms на TcrCmr. С помощью этого вектора можно клоировать разные промоторы и сравнивать их функционирование в разных грамотрицательных бактериях.