В диапазоне от 4000 до 10 Å говорят об ультрафиолетовых лучах, а в диапазоне от 10 до 0,1 Å – об ионизирующем излучении. УФ-свет и ионизирующее излучение поглощаются ДНК клетки, в которой они вызывают различные нарушения. Ионизирующие излучения индуцируют в молекулах ДНК одно- и двунитевые разрывы углеводно-фосфатных цепей и изменения азотистых оснований. Основными фотопродуктами в ДНК после действия УФ-лучей являются циклобутановые димеры тиминовых оснований, располагающиеся в одной нити. Наибольший летальный эффект УФ-лучей наблюдается при длине волны 260 нм, при которой отмечается максимум поглощения УФ-лучей молекулами ДНК.
1. При оценке большое значение имеет плотность изучаемой бактериальной взвеси. УФ-лучи интенсивно поглощаются бактериальной клеткой, а при высокой концентрации клетки могут экранировать друг друга (превышающих 108 кл/мл).
2. Выживаемость клеток зависит от состава среды. Лучше проводить облучение в буфер. растворах.
3. Летальный эффект УФ-лучей зависит также от физиологического состояния клеток.
Для эксперимента необходима культура бактерий, находящихся в экспоненциальной стадии роста.
Культуру разводят в 10 раз жидкой полноценной питательной средой и инкубируют еще 2 часа на качалке. Затем бактериальные клетки отмывают и ресуспендируют физиол.р-ре.Облучение культуры осуществляют в открытых чашках Петри в течение заданного времени (30, 60, 90, 120 и 240 с) на расстоянии от источника 40 см. Для каждой дозы используют отдельную чашку, в которую наливают по 5 мл взвеси. Во время облучения содержимое чашек перемешивают. Для определения количества жизнеспособных клеток отбирают пробы по 0,5 мл из контрольной и 5-ти облученных взвесей и после серии десятикратных разведений в физиол. Р-ре из последних разведений проводят высевы на поверхность агаризованной полноценной питательной среды в двух чашках Петри. Количество колоний подсчитывают, определяют титр клеток и выживаемость облученных УФ-светом клетокв процентах от контроля. По оси абсцисс откладывают время облучения, по оси ординат выживаемость в процентах.
Поможем написать любую работу на аналогичную тему