Типы микроскопии и использование.

Основными задачами микроскопии являются следующие:

• Выявление микроорганизмов в различных материалах.

• Ориентировочная идентификация микроорганизмов в исследуемом образце.

• Изучение некоторых морфологических признаков и структур микроорганизмов.

• Изучение окрашенных мазков из колоний и чистых культур.

Светлопольная микроскопия позволяет исследовать объекты в проходящем свете в светлом поле. Данный вид микроскопии предназначен для исследования морфологии, размеров клеток, их взаимного

расположения, структурной организации клеток и других особенностей. В микроскопии применяют несколько иммерсионных систем: масляную,глицериновую, водную.

Фазово-контрастная микроскопия представляет ценность в том, что с ее помощью можно наблюдать живые объекты, которые имеют коэффициенты преломления, близкие к коэффициентам преломления

среды. С помощью фазово-контрастной микроскопии изучают форму, размеры, взаимное расположение клеток, их подвижность, размножение,прорастание спор микроорганизмов и т. д.

Темнопольная микроскопия основана на освещении объекта косыми лучами света. При таком освещении лучи не попадают в объектив, поэтому поле зрения выглядит темным. Если в исследуемом препарате содержатся клетки микроорганизмов, то косые лучи отражаются от их поверхности, отклоняются от своего первоначального направления и попадают в объектив. На интенсивно черном фоне видны сияющие объекты.

Люминесцентная микроскопия основана на способности ряда веществ биологического происхождения или некоторых красителей светиться под действием падающего на них света. Микроорганизмы, содержащие хлорофилл, витамин В12, алкалоиды, некоторые антибиоти-

ки, обладают первичной люминесценцией. Клетки микроорганизмов, в которых люминесценция слабо выражена или отсутствует, обрабатывают специальными красителями – флуорохромами (акридиновый

оранжевый, примулин, родамин и др.) в виде сильно разбавленных водных растворов: 1:500 – 1:100000.

Разработанные на основе люминесцентной микроскопии иммуно-флюоресцентные методы используются для визуализации иммунохимических реакций, основанных на специфическом взаимодействии антигена изучаемого объекта и меченых флюоресцентными красителями антител.

Электронная микроскопия позволяет обнаружить объекты, которые не разрешаются при использовании световых или ультрафиолетовых лучей. Например, с помощью напыления солей тяжелых металлов, окружающих бактерию и проникающих в поверхностные неровности, получают контрастирование за счет дифференциальной задержки электронов. Этот эффект получил название негативного контрастирования.

Детали внутреннего строения выявляют на срезах бактерий, залитых в полимерный материал. Предварительно бактерии фиксируют и обрабатывают солями тяжелых металлов для получения необходимого контраста. Часть электронов проходит через образец, а другие рассеиваются компонентами структуры, в результате чего формируется изображение на экране или пленке. Электронный микроскоп, в котором изображение формируется благодаря прохождению (просвечиванию) электронов через образец, называют просвечивающим (или трансмиссионным).

В сканирующем (растровом) микроскопе пучок электронов быстро сканирует поверхность образца, вызывая излучение, которое формирует изображение на светящемся экране.

При методе сколов (замораживании–оттаивании) проводят изучение внутреннего строения клеточных мембран. Обнаженную внутреннюю поверхность мембран оттеняют платиной.

• компъютерная интерференционная микроскопия позволяет получить высококонтрастное изображение при наблюдении субклеточных структур;

• лазерная конфокальная микроскопия дает возможность получить отчетливое изображение и наблюдать объекты в фокусе по всему полю. При сочетании с компъютерной техникой возможна пространственная реконструкция изучаемого объекта;

• рентгеновская микроскопия, позитронная эмиссионная томография позволяют наблюдать объекты не в вакууме, а в обычных условиях.