СТАФИЛОКОКК

Стафилококкозы в стационарах 40-60%

В настоящее время род Staphylococcus уже к семейству Micrococcaceae не относится (с начала 90-х годов). Семейства Micrococcaceae не существует (т.к. генетического родства между его составляющими нет). Объединялись лишь по признаку грамположительных аэробных и факультативно-анаэробных кокков, делящихся в нескольких плоскостях.

Micrococcus - генетически родственник актиномицетов.

Staphylococcus – генетически родственник клостридий.

При исследованиях на фузобактерии, правотеллы, бактероиды (строгие анаэробы) на бескислородной среде если не применять среду с антибиотиками (аминогликозиды), то стафилококки (да и энтеробактерии) забьют всё!!!

Метод истощающего посева

Стафилококки – факультативные анаэробы. Micrococcus – строгие аэробы

Дифференциация – тест с аэробным и анаэробным расщеплением глюкозы. Все Staphylococcus глюкоза+ без газа под вазелиновым маслом. Micrococcus – нет.

Staphylococcus – более 30 видов, с подвидами – 44. Дифференцируются они по 33 тестам.

Граница галотолерантности – среда с 7,5 и более % NaCl.

Micrococcus – на 6,5% ещё растут, а выше – только Staphylococcus. (ЖСА – 10% NaCl). Некоторые виды 15% NaCl.

Молочно-солевой агар –растут микрококки, т.к. там NaCl ниже.

У буржуев – среда Чапмена - маннитолово-солевой агар (1% маннита)– 7,5% NaCl. Маннитол=маннит, как глицерол=глицерин

Целенаправленное выделение Staphylococcus (например при санитарно-бактериологических исследованиях). Зона пожелтения за счёт образования кислоты. Как его альтернатива у нас – ЖСА.

Т.е. если выделяем кокки на среда с ≥ 7,5 NaCl то они всегда глюкозо+, т.к. это Staphylococcus, а Micrococcus не растут

Морфология микрококков чуть отличается от стафилококков – и колонии и клетки крупнее, чем у стафилококков.

У каждого человека на коже 7-10 видов микрококков (а всего около 15 видов), М. luteus – преобладает - крупные желтые колонии на неингибиторных средах(старое название – воздушные сарцины, истинные сарцины в аэробных условиях не растут!!!). Равномерно красятся по Граму. В виде кучек, тетрад, пакетов. Другие – белые, бесцветные и т.п. M.livi – эмалево-белые. M.cristi  - красные колонии.

Стафилококк по Граму окрашивается неравномерно (ситцевость окраски). Гроздья – чаще дает S. aureus, а так кучки, тетрады, пакеты и т.п. Стафилококки с жидкой стеды – одиночные, пары, кучки.

На средах без желтка пигмент S. aureus не образуется и колонии бывают серыми.

Каротиноиды в воде не растворяются и среда вокруг колонии никогда не окрашивается у Staphylococcus и Micrococcus.

Ангелина Гесс – в середине 19 века ввела агар в среды

Micrococcus тоже УПМФ – сепсис. In vitro чувствителен ко всему. У животных пенициллин – 5 единиц на инъекцию – на уровне изобретения пенициллина – лечит сепсис. Но in vivo лечить очень трудно. Сепсис у больных с сердечным шунтированием. Если попадают в аппарат искусственного кровообращения.

Planococcus – нас не интересуют – в морской воде и человеку не опасны

Стоматококки – 1 вид. Хорошо растут на КА (на КА вообще вырастает что угодно), но на солевых средах они не растут. Особенного клинического значения не имеют. УПМФ. Очень редко вызывают гингивиты и стоматиты (но чаще эти заболевания вызывают анаэробы и вирусы).

S. aureus subsp. aureus

S. aureus subsp. anaerobius -  в аэробных условиях не растет (строгий анаэроб)

Среди стафилококков нет сапрофитов – все условно-патогенные. Более 86 нозологических форм заболеваний.

S. aureus и S.epidermidis – по 45 % всех стафилококкозов. Пищевые отравления - только S. aureus (S.epidermidis – может вызывать лишь у грудных детей). Энтеротоксины продуцируют только S. aureus.

У каждого человека 10-12 видов стафилококков живет на коже.

Передние отделы носа – главный биотоп. Там больше всего на единицу площади.

S. epidermidis также может, наряду с S. aureus вызывать вспышки ВБИ.

У новорожденных:  конъюнктивиты S. epidermidis раньше в Москве в 70-х годах; госпитальные пневмонии S. epidermidis сейчас.

Плазмиды передаются со скоростью около 2 часов (2 часа стафилококк побыл на коже другого человека и получил новую плазмиду).

Носительство.

В родовспомогательных учреждениях плановое исследование на стафилококк не проводится (только при вспышках) – 345 приказ. У хирургического профиля – 720 приказ до сих пор (нигде в мире не проводится). Количество стафилококковых инфекций одинаково и у «буржуев» и у нас, независимо от санации.

По тест-системам можно дифференцировать до 12-15 видов стафилококков и несколько видов микрококков.

691 приказ – по роддомам отменен. Новый 345 приказ не имеет бактериологической части, поэтому по бактериологии все до сих пор ориентируются по 691 приказу.

Плановое обследование на носительство стафилококка отменено.

Коагулазоположительных стафилококков сейчас 5 видов.

S. aureus не дает коагулазу очень редко – при первичных посевах от больного с массивной антибиотикотерапией. Поэтому  пересеваем на косяк и потом снова ставим плазму. Если нет – это не S. aureus.

Пигмент на средах с повышенным содержанием белка и свет (ЖСА, сывороточная среда с белком)

Среди коагулазоотрицательных стафилококков некоторые тоже могут образовывать пигмент. S промагенес – на любой среде образует желтый пигмент

Ацетоин=ацетилметилкарбинол – реакция VP (Фогес-Проскауэра)

±    d: + 11-89%

Среда Гиса с глюкозой полужидкая. При посеве с солевой среды всегда глюкозоположительны, по крайней мере, в верхней части столбика.

Окончательный отрицательный ответ по полужидкой среде Гиса с глюкозой выдаётся только на 5-е сутки.

Если газ – предполагаем, что микст или вообще не стафилококк.

Полужидкая среда с маннитом исключена в 1974 году – окончательный отрицательный ответ только на 5-е сутки. Ставится только на чашке – ответ наутро.

Плотная среда с глицерином (1%) (может заменяться любым сахаром и спиртом). Жидкие и полужидкие среды для дифференциации внутри родов Staphylococcus и Micrococcus не используются никогда. Индикатор –бромтимолсиний, рН – нейтральный; или бромкрезолкрасный, бромтимолкрасный. Сеем бляшками – до 10 культур на чашку. Радиальной полосой – до 6 культур на чашку. Вокруг стафилококка – пожелтение. Микрококки глицерин не утилизируют.

Стафи-тест – хлопьеобразование. Клямпинг-фактор – реакция хлопьеобразования.

Реакцию читать только в момент постановки. Если встряхнуть – агрегаты разваливаются и получается равномерная муть.

S. aurecularis на тест-системах он на 95-99% даёт аналогичность S. aureus и только по реакции плазмокоагуляции его можно отличить.

Коагулазоотрицательные стафилококки

При определённых условиях могут давать пигмент.

У стафилококков по 1-2 тестам дифференциацию до вида провести невозможно.

Растет в плазме в виде хлопьев Маннит+ всего 6-7 видов.

У 100% S. aureus гемолитическая активность.

S. saprophiticus встречается очень редко. Циститы и уретриты у женщин молодого возраста – чувствителен к антибиотикам и химиопрепаратам

Коагулазонегативные не могут стать коагулазоположительными.

S. epidermidis никогда не бывает коагулазоположительным, что бы не было написано в 720 приказе

Неспоровая клетка может прожить 10-12 дней.

Щелочная фосфатаза характерна только для S. epidermidis.

Щелочная фосфатаза – паранитрофенолфосфат или фенолфталеинфосфат из тестов на ЩФ в биохимии– 50 мг на 100 мл агара до 20 штаммов на чашку.

Паранитрофенолфосфат → паранитрофенол (желтый) и окраска среды в лимонно-желтый цвет.

Фенолфталеинфосфат → фенолфталеин (бесцветный). Защелачиваем 3-10% р-ром аммиака (капаем на крышку чашки) Колонии малиновые.

Можно купить 10% р-р фенолфталеинфосфата. Хранится в холодильнике годами. 0,5 мл р-ра на 100 мл агара.

S. epidermidis природно чувствительны к новобиоцину.

Лецитовителаза (желточный фактор) – в международной классификации не используется, только у нас.

20-25% S. epidermidis лецитиназопозитивные.

На 80% S. aureus – человеческого происхождения – дают лецитовителазу. Лецитиназонегативные S. aureus – от животных.

Другие стафилококки тоже могут давать. Т. е. Если лецитовителаза+, то это на 80% S. aureus, на 20% другие стафилококки.

Чашки ЖСА на просвет – зона просветления (протеаза) – нам она не важна.

Помутнение – преобладают липазы – также не важны.

Буржуйские кровяные среды – из эритроцитов барана. Считалось, что человеческие штаммы S. aureus продуцируют только α-гемотоксин, но сейчас есть и β-гемотоксин. Это можно разобрать только на эритроцитах барана.

β-гемотоксин даёт зону неполного гемолиза через сутки, а если затем поставить до конца рабочего дня в холодильник – то зона полностью просветлеет.

S. aureus продуцирует 2 фермента

1)       термолабильная ДНКаза (нуклеаза) – она есть у всех стафилококков и у большинства других микробов.

2)       Термостабильная ДНКаза (нуклеаза) – есть только у S. aureus. Не разрушеется при кипячении и даже кратковременном автоклавировании.

И по нашим приказам определяется только термолабильная ДНКаза (смысла нет).

В прогретой пище (при скрытии факта ПТИ) стафилококк разрушается, а токсины остаются. По наличию термостабильной ДНКазы можно определить, был ли S. aureus.

По приказам высокополимеризированную ДНК 1-2 мг на 1 мл среды (рН=8,0). Посев на чашку бляшками (или уколом). 24 часа. Проявляем, заливая чашку 3N HCl, образуется преципитат ДНК с HCl и где ДНКаза сработала – видим зону просветления. У S. aureus радиус её 10-12 мм, у S. epidermidis её радиус 4-5 мм. Вокруг лунки с убитой культурой S. aureus – 7-8 мм.

S. epidermidis образует только термолабильную ДНКазу, S. aureus – обе ДНКазы – зона больше.