Кампилобактеры

По ВОЗ – ОКИ расшифровываются так – сальмонеллезы и шигеллезы в сумме около 20%, кампилобактериозы также около 20%.

Впервые обнаружил Escherich более 100 лет назад, выделить не смог, но мазок нативных фекалий (по Граму, затем просто 1% основным фуксином). Грамнегативные палочки. Окрашиваются 1% основным фуксином примерно за 20 секунд. Мазок приготовляется примерно также как мазок крови, высушивается, фиксируется фламбированием. Другие микроорганизмы за 20 секунд не окрашиваются

Чем меньше ребенок – тем больше бактерий. У грудных  - 10-15 микробных клеток в поле зрения, у взрослых – единичные клетки в поле зрения.

Группа мелких полиморфных прямых и изогнутых палочек (микроколонии в несколько десятков микробных клеток, мазки фекалий смотрятся на 100 полей зрения).

Полиморфны. Наиболее диагностически значима форма «крыло летящей чайки»                     но таких мало. С, S, прямые палочки разной длины и толщины и даже кокки.

Самостоятельный род, ни в какие семейства не входят.

Грамотрицательные, полиморфны, подвижные (жгутики на концах), 0,5-5-8 микрон длина, 0,2-1 микрон толщина. Длина равна длине энтеробактерии, но примерно в 2 раза тоньше.

В раздавленной капле подвижность медленнее вибрионов, но быстрее цереус (надо учесть,  что НАГи движутся медленнее, можно разглядеть морфологию клетки, в отличие от холерного вибриона, который просто летит)

Не продуцируют ферменты, гемолиз не образуют, пигмента не образуют, VP и MR отрицательны, индол-отрицательны, липаз не продуцируют, уреазаотрицательны.

Все каталазоположительны, кроме C. mucosalis и C. Sputorum.

Микроаэрофилы (аэробы, акцептор электронов только кислород, но его оптимальная концентрация 1-12% для разных видов Campylobacter). Растут почти все при 5% О2. Те которые нас интересуют – чуть хуже, чем при 5% О2, растут при 12% О2 (эксикатор со свечой).

На среде Китта-Тароцци кампилобактеры выращивали ветеринары с 20-х годов.

В среду для кампилобактерий обязательно добавляют кровь (дефибринированную, но не гемолизированную).

У овец вызывают вспышки кампилобактериоза – внутриутробная гибель плода.

Люминесцентные сыворотки для видотипирования и серотипирования кампилобактерей раньше были у ветеринаров.

Через 48 часов в среде Кита-Тароцци – под слоем вазелина серый диск и опушение вокруг кусочка печени.

Если культуру поместить в бульон с глицерином, то при –20 °С она хранится бесконечно долго

Овцы, коровы, птицы, котята, щенки (у взрослых редко). Диарея котят и щенков – 30% кампилобактериоз.

Сохраняется в нехлорированной воде.

Пищевой (в том числе при вынужденном убое птицы и нарушениях в её разделке; в замороженных тушках сохраняются бесконечно, в охлажденных тушках погибает через несколько недель), фекально-оральный путь (в нативных фекалиях сохраняются, но каждый день количество уменьшается на 1 логарифмическую единицу)

Клиника бывает очень тяжелой. Температура до 38 °С (37°С – 37,5°С). Диарея до 10 раз в сутки (95%), у 50% могут быть боли в животе, симулирующие «острый живот». Гемоколит – не всегда. Выраженного обезвоживания почти не бывает (хотя токсин близок к холерогену).

После клинического выздоровления возникает очень длительное носительство от 1 месяца до 1 года – в среднем 3-6 месяцев (формирование бытового очага).

2 типа кампилобактерий.

I тип - Энтротоксигенные штаммы – у нас и в большинстве регионов земного шара. Энтеротоксин близок к холерогену, но алгида нет. К тому же подъем температуры и резкие боли в животе.

II тип - Энтероинвазивные штаммы (гемоэнтероколиты)– в Северной Европе, у нас их нет (вернее бывает очень-очень редко). Цитотоксин. Инвазивная активность с экзотоксином → гемоколит

Внутриутробная гибель плода (38-39 недель)

Сезонность – весенне-летне-осенний подъем. По возрастам – без особенностей.

20-25-30% диарей детей 3-4-5 дневного возраста – кампилобактерии. (по др. данным 5-7% диарей новорожденных - кампилобактериоз).

Кампилобактерии могут давать рецидивы без лечения антибиотиками.

C. jejuni – 90% кампилобактериозов человека и животных.

C. coli – 5% заболеваний у человека и животных, а также кампилобактериозы некишечной этиологии: реактивные артриты крупных суставов группы Б. (асептические артриты, неинфекционные артриты) – на 3-м месте среди возбудителей - кампилобактерии (на 1-м месте – хламидии).

5% - остальные кампилобактеры.

C. fetus – типовой вид рода. У человека вызывают заболевание редко, в основном яловость коров.

C. mucosalis - есть практически у всех – сапрофит. Зубная бляшка. 10-15% бактерий в полости рта (каталазоотрицательный).

C. sputorum – в кишечнике свиньи.

Питательные среды должны быть на очень качественной питательной основе.

Основа сред для кампилобактерий – печеночные и сердечно-мозговые отвары. Концентрация аминного азота – 150-200 мг%. У нас основы делает Махачкала, Оболенск и еще кто-то.

В основе – среда для бруцелл. Остаточный азот 180-200 мг%. Обычные среды – 90 мг% остаточного аминного азота.

В основу обязательно добавлять вещества типа пирувата натрия, снижающие Oxi-Red потенциал (если написано, что среда для кампилобактерий – туда это уже добавлено).

Обязательно 5% (лучше 7%) дефибринированной крови человека (лучше барана) без консерванта. Не обладают гемолитической активностью, кровь нужна для снятия токсического действия среды на микробов и снижения Oxi-Red потенциала.

Обязательно добавлять антибиотики так как кампилобактерии в принципе не могут расти в ассоциации с другими бактериями на искусственных питательных средах – только в чистой культуре. Поэтому надо добавить комплекс антибиотиков, подавляющий весь спектр кишечных бактерий, кроме кампилобактеров. 3-5-7 антибиотиков широкого спектра дейтсвия из разных групп, чтобы подавить всю кишечную микрофлору, кроме кампилобактерий.

Буржуи свои среды для кампилобактерий сразу разливают в чашки и упаковывают. Упаковку вскрыли – остальные чашки надо поместить в бескислородную среду (анаэростат и т.п.) иначе за 2-3 дня они перестают работать. В обычных условиях хранить готовые чашки нельзя.

Свежеприготовленная питательная среда (регенерация питательной основы+добавки и посев).

«Газпаки» - микроаэрофильная система либо «кампилобактер-плюс». Если эксикатор притереть на вазелиновое масло – через 24 часа может начаться подсос кислорода.

Через 48 часов в эксикаторе со свечой можно выделить кампилобактерии. Колонии очень мелкие – максимум до 1-2 мм, почти плоские, полупрозрачные без пигмента и гемолиза.

Дрожжи и грибы, P. aeruginosa также могут вырастать, сколько бы антибиотиков не добавили. Колонии тоже мелкие, полупрозрачные без пигмента и гемолиза из-за малого содержания кислорода. Также могут расти споровые а иногда и какие-то пигментообразующие микроорганизмы.

Иногда кампилобактерии могут давать ползучий рост если среда свежая и влажная. Очень нежный, как будто высох конденсат (в отличие от грубого роения протея).

Кокковые формы говорят о том, что культура гибнет.

Не выдерживает вторичных пересевов.

Природная устойчивость ко всем группам цефалоспоринов. Чувствительны к левомицетину (он запрещен в большинстве стран), аминогликозидам, эритромицину (и его ряду - макролиды).

Кери-Блер –стандартная транспортная среда.

Китт-Тароцци

Нативные фекалии без добавок.

Метод истощающих посевов.

На свежей чашке кампилобактерии могут ползти (полупрозрачный налет – нежный, не как у протея). Чтобы заставить ползти – на крышку капнуть физраствора для 100% влажности.

На 48 часов в микроаэрофильную среду при 42 °С.

По нашей методике – ещё пересев на ту де среду и в те же условия для накопления культуры (но большинство штаммов не выдерживают вторичных пересевов).

Культура в высушенном виде (лиофилизированная) (хранится очень плохо) либо на транспортной среде – надо сразу посеять на среды для кампилобактерий с антибиотиками. Оставшуюся часть – на бульон с глицерином и в морозильник (лучше несколько маленьких пробирок).

Заморозка→ достали пробирку, раскаленной петлей  - в этот кусок льда и потом эту петлю размазали по среде. А пробирку опять в морозилку (при размораживании культура может погибнуть).