Культивирование одиночных клеток представляет большой интерес в связи с возможностью получения на их основе генетически однородных клонов. Важно использовать одиночные клетки (протопласты) и для соматической гибридизации. Для изолирования одиночных клеток используют рыхлый каллус, низкоагрегированную суспензию, изолирование отдельных клеток непосредственно из тканей целого растения (например, мезофилла листа после мацерации его ферментам). Используют следующие методы выращивания одиночных клеток:
Метод культуры–няньки. Одиночные клетки, изолированные стерильной петлей или микропипеткой из каллуса или суспензионной культуры, переносятся на стерильную фильтровальную бумагу, помещенную за 2-3 дня до изолирования клеток на верхушку каллусной ткани-няньки. Клетка на фильтре получает от каллуса питательные вещества в результате диффузии через фильтровальную бумагу.
Метод кормящего слоя близок к методу культуры-няньки. В качестве кормящего слоя используют активно делящиеся клетки суспензионной культуры того же вида растений, что и одиночная клетка. Другой вариант культивирования одиночных клеток на основе выделений из делящихся клеток - кондиционирование среды. В этом случае клеточную суспензию в экспоненциальной фазе фильтруют через бактериальный фильтр, после чего фильтрат ( среду с выделениями клеток суспензии) добавляют в среду для культивирования одиночных клеток.
Метод микрокапель основан на асептическом культивировании одиночных клеток в капле жидкой среды, окруженной стерильным минеральным маслом в специально сконструированных микрокамерах.
Метод плейтинга – высев клеток в агаризованные среды. Суспензию одиночных клеток смешивают с расплавленной агаризованной средой , охлажденной до 35 –400 С и разливают тонким слоем в стерильные чашки Петри, которые инкубируют в темноте или рассеянном свете.
Метод пластинок – реплик. На чашку, посеянную методом плейтинга, наносят капроновую сетку, чтобы она находилась в контакте с агаризованной средой. Клетки прорастают через нити сетки и прилипают к ней. Через 20 дней контакта сетку переносят на новую чашку Петри обратной стороной. При этом на новой чашке копируется расположение клеточных клонов.
Поможем написать любую работу на аналогичную тему