Чистой культурой микроорганизмов называют популяцию бактерий одного вида, представляющую потомство одной клетки. Выделение чистой культуры предполагает проведение трех этапов: 1)получение накопительной к-ры; 2) выделение чистой к-ры; 3) определение чистоты выделенной к-ры.
Чаще всего это делают путем изолирования отдельных клеток на твердой питательной среде, используя метод посева штрихом или разлива по чашкам небольшого количества жидкой культуры (метод предельных разведений). Получение изолированных колоний на твердой питательной среде достигается либо путем рассева взвеси микроорганизмов шпателем (метод Коха), либо с помощью бактер-ой петли (метод истощающего штриха). Рассев шпателем (метод Коха). Рассев петлей (метод истощающ.штриха) предполагает высев бактериологической петлей из накопительной культуры на поверхность агариз. среды в ч.Петри. Последовательные разведения в твердой среде – самый простойспособ посева по чашкам, после инокуляции пробы в пробирку со стерильным расплавленным и охлажденным агаром среду перемешивают, выливают в чашку Петри и дают ей застыть. Для получения хорошо изолиров. колоний готовят ряд последовательных десятикратных разведений и по 1 мл проб вносят сразу в чашку, добавляют 15 – 20 мл расплавленной агаризованной среды и смешивают, покачивая чашку. Иногда отдельные колонии оказываются погруженными в агар и извлечь их можно только механически.
Определение чистоты выделенной культуры
Выросшие изолированные колонии отсевают бактериологической петлей на поверхность скошенной агаризованной среды в пробирке. При визуальном контроле исследуют рост культуры по штриху на поверхности скошенной среды; в том случае, если рост неоднороден, считают, что культура загрязнена и требуется ее дополнительная расчистка. При описании колоний бактерий определяют их диаметр в миллиметрах, пигментацию, форму (точечная, круглая, волокнистая, неправильная, ризоидная), высоту, профиль (плоский, высокий, выпуклый), вид края.
Билет 19.
- Биосинтез аминокислот
Источником азота для аминокислот у разных групп бактерий являются нитраты, нитриты, молекулярный азот, аммиак. Перевод неорганического азота в орг. соединения происходит всегда через образование аммиака, и поэтому нитраты, нитриты, молекулярный азот предварительно восстанавливаются до аммиака и только после этого включ. в состав орг. соедин.
Восстановительное аминирование кетокислот аммиаком. При взаимодействии а-кетоглутаровой кислоты с аммиаком при участии фермента глутаматдегидрогеназы образуется глутаминовая кислота:
При участии фермента аланиндегидрогеназы пировиноградная кислота взаимодействует с аммиаком с образованием аланина:
Некотор.ак образуются путем амидирования. Из глутаминовой кислоты с участием фермента глутаминсинтетазы образуется глутамин:
Большинство получает аминогруппу от одной из пе- рвичных ак в результате трансаминирования, или переаминирования. Из свободных аминокислот в цитоплазме бактерий количественно преобладает глутаминовая кислота. Она служит донором аминогрупп при биосинтезе многих аминокислот. Глу взаимодействуя со щук при участии фермента аминотрансферазы, обеспечивает образование аспарагиновой кислоты. Отдав аминогруппу, глу в а-кетоглутаровую, которая выступает в качестве стартового вещества для синтеза глутаминовой кислоты.
Путь биосинтеза ароматических ак (триптофана, фенилаланина, тирозина). Как уже отмечалось, исходными веществами для их синтеза являются эритрозо-4-фосфат и фосфо-енолпируват. Молекулы этих веществ конденсируются с образованием С7-соединения, которое подвергается циклизации, образуя 5-дегидрохинат. Через ряд этапов 5-дегидрохинат превращается в хоризмовую кислоту, которая является общим промежуточным продуктом биосинтеза всех ароматических аминокислот. На этом этапе биосинтет. путь разветвляется, один путь ведет к биосинтезу триптофана через антраниловую к-ту, а другой – префеновой к-ты, кот. является предшеств. как тирозина, так и фенилаланина.
Поможем написать любую работу на аналогичную тему