Необходимо согласованно провести ряд последовательных этапов работы:
1. Определить, какой тип мутанта соответствует цели исследования (делеционный, с точковой мутацией, с заменой пар оснований,условно-летальный и т. д.) 2. Выбрать наиболее подходящий мутаген для индукции мутаций, что определяется двумя факторами: типом мутации, которую хотят получить и относительной эффективностью мутагена в отношении желаемой мутации. 3. Создать условия для выражения (экспрессии) новой мутации. Это обусловлено тем, что при практически любых условиях роста бактериальная клетка содержит от полутора до двух копий хромосом. В связи с этим целесообразно дать культуре клеток, обработанной мутагеном, расти в течение определенного времени и тем самым исключить возможность присутствия хромосомы, содержащей мутацию, и исходной. Длительность периода роста зависит как от времени генерации бактерий, так и особенностей роста. 4. Провести обогащение по желаемому мутанту для повышения вероятности его выделения. Обычно возникновение мутаций – относительно редкое событие. Особенно трудно выделить мутантные клетки, если применяются непрямые методы селекции. В самой распространенной методике обогащения используется антибиотик пенициллин. При выращивании культуры, содержащей как мутировавшие, так и немутантные клетки в синтетической среде, не обеспечивающей рост мутантов, пенициллин вызывает избирательную гибель только активно делящихся клеток, нарушая у них процесс синтеза клеточной стенки. В оптимальных условиях можно достичь 1000-кратного обогащения мутантами по отношению к немутантам.5. Обнаружить новый мутант соответствующими прямыми или непрямыми методами отбора: прямым или непрямым.6. Изучить свойства мутанта, картировать локус новой мутации, т.е определить ее локализацию на бактериальной хромосоме.
Поможем написать любую работу на аналогичную тему