Поделись с друзьями

Первым этапом в изучении свойств белков является их выделение и очистка, т.к. в клетках всех организмов и биологических жидкостях белки находятся с другими органическими и неорганическими веществами, образуя с ними связи различной прочности. Выделение и очистка белка весьма сложный и длительный процесс, поскольку производится во многом эмпирически. Исходную ткань животных или растений измельчают, растирают в гомогенизаторе или в ступке с кварцевым песком до однородной (гомогенной) массы, добиваясь разрушения клеток. Иногда клеточные мембраны разрушают попеременным замораживанием и оттаиванием сырья, ультразвуком и др. методами, обеспечивающими наиболее полное проникновение растворителя. Растворимые белки экстрагируют водой или растворами нейтральных солей, этанола, кислот, щелочей, глицерина и др. веществ.

После экстракции проводят разделение белковой смеси на индивидуальные белки - фракционирование, которое достигается методами осаждения, хроматографии, электрофореза, кристаллизации, ультрацентрифугирования и др.

Для очистки белков от низкомолекулярных примесей применяют диализ, кристаллизацию и перекристаллизацию. После очистки определяют однородность белка несколькими методами основанными на различных свойствах молекулы: размер, заряд, растворимость, биологическая активность и т.д. Например, диск-электрофорез в полиакриламидном геле. Если белок движется в виде одной полосы и обладает определенной биологической активностью: ферментативной, имунной, гормональной и т.д., это говорит о его однородности,

Измельчение, гомогенизацию, экстрагирование, выделение и очистку проводят при низких температурах (от +4 до -3 С0), во избежание денатурации и разрушения белков микроорганизмами.

Выделенные и очищенные белки сушат при минусовых температурах в вакууме (.лиофильная сушка). При соответствующих условиях хранения, высушенные белки длительно сохраняют биологические свойства.

Материалы по теме: