Поделись с друзьями
Нужна помощь в написании работы?

Молекулярные массы белков колеблются от 6 тыс. до нескольких миллионов дальтон:

Белок

Молекулярная масса

Инсулин

Рибонуклеаза поджелудочной железы

 Миоглобин

Лактоальбумин

b-Казеин

Пепсин

b-Лактоглобулин

Химотрипсин

Альбумин яиц

Гемоглобин млекопитающих

Дифтерийный .токсин

Гексокиназа дрожжей

Лактатдегидрогеназа

Глобулины крови

Цитохромоксидаза

Каталаза

Коллаген

РНК-полимераза

Миозин

Глутаминсинтетаза

Глутаматдегидрогеназа печени быка

Вирус табачной мозаики-рибонуклеопротеин

5733

12600

17000

17400

24000

35500

38000

41000

45000

64500

74000

96000

140000

176000

200000

250000

345000

400000

493000

600000

1000000

40600000

Молекулярные, массы (М.м.) белков определяют специальными химическими и физическими методами. Один из химических методов основан на определении аминокислотного состава белка. Знания аминокислотного состава и первичной структуры белка позволяют с высокой точностью вычислить его М.м. (Средняя М.м. остатка аминокислоты в полипептидной цепи составляет 110).

Т.Сведберг в 1925 г. предложил гравитационный метод определения М.м., основанный на скорости седиментации (оседания) молекул белка в растворе при ультрацентрифугировании. Скорость седиментации выражают в единицах Сведберга, например: 5S, 5,8S, I8S, 40S и т.д.

В настоящее время разработаны и используются более простые и эффективные методы определения М.м. белков: хроматографический (гельфильтрационный) и электрофоретический. Определение методом гельфильтрации начинают с калибровки колонки. Для этого через колонку с сефадексом пропускают 5-6 белков с известными М.м. и строят график, откладывая значения логарифмов М.м. против их элюционных объемов (объем растворителя необходимый для извлечения конкретного белка). Пользуясь графиком, М.м. исследуемого белка определяют по величине его элюционного объема т.к. между логарифмом М.м. глобулярного белка и элюционным объемом существует прямая зависимость.

Разновидностью метода является тонкослойная гельфильтрация или тонкослойная хроматография (гель тонким слоем наносят на твердую основу). Длина пробега белка (в мм.) через тонкий слои сефадекса находится в логарифмической зависимости от М.м. белка.

Метод гельфильрации имеет преимущество в том, что не требуется предварительной очистки белка, т.к. каждый из сопутствующих белков проходит через колонку со своей скоростью, определяемой М.м..

При использовании метода диск-электрофореза в полиакриламидном геле также строят график зависимости между логарифмом М.м. калибровочных белков и величинами пробега белковых молекул, а затем, определив подвижность исследуемого белка в полиакриламидном геле, по графику находят его массу.

Современные методы позволяют определять М.м. белков с погрешностью до 5 %. Наиболее точный результат может быть получен при определении несколькими методами.

Материалы по теме: